人肾透明细胞腺癌细胞786-O

库存 ：100

供应商 ：信帆生物

生长状态 ：贴壁生长

规格 ：1×10⁶cells

菌种鉴定：
（1）传统的生化方法对微生物进行正确的分类存在较大的困难。而随着分子生物学技术的发展，核酸序列分析已被广泛的应用于微生物鉴定中，通过基因序列分析，可以快速准确地对微生物的种属进行鉴定。目前、原核生物的种属鉴定主要采用16S rDNA测序技术，真核生物主要采用18S rDNA或ITS测序。
（2）16S rDNA是编码原核生物核糖体小亚基Rrna(16S rRNA)的DNA序列，存在于所有细菌染色体基因组中。16S rDNA分子大小适中，突变率小，是细菌系 统分类学研究中最常用，最有用的“分子钟”。其序列包含9个可变区（variable region）和10个恒定区（constant region）。保守序列区域反映了生物物种 间的亲缘关系，而高变序列区域则能体现物种间的差异。16S rDNA的序列特征为不同分类级别的近缘种系统分类奠定了分子生物学基础。
（3）与细菌多样性分析类似，在真核微生物中也有三类核糖体RNA（rRNA），包括5.8S rRNA、18S rRNA和28S rRNA。18S rRNA基因是编码真核生物核糖体小亚基的DNA序列，其中既有保守区，也有可变区（V1-V9，没有V6区）。保守区域反映了生物物种间的亲缘关系，而可变区则能体现物种间的差异，适用于作种级及以上的分类标准。其中，V4区是文献中常用的检测片段。
（4）ITS序列是内源转录间隔区（Internally Transcribed Spacer），位于真菌18S、5.8S和28S rRNA基因之间，分别为ITS 1和ITS 2。 在真菌中，5.8S、18S和28S rRNA基因具有较高的保守性，而ITS由于承受较小的自然选择压力，在进化过程中能够容忍更多的变异，在绝大多数真核生物中表现出极为广泛的序列多态性。同时，ITS的保守型表现为种内相对一致，种间差异较明显，能够反映出种属间，甚至菌株间的差异。并且ITS序列片段较小（ITS 1和ITS 2长度分别为350 bp和400 bp），易于分析，目前已被广泛用于真菌不同种属的系统发育分析。
（5）使用PCR技术，对16S rDNA,18S rDNA或ITS序列进行扩增，然后PCR产物进行测序，即可获得相应的碱基序列。然后将序列在NCBI上进行Blast比对，即可获知与该序列同源性较高的已知序列，为确定菌种的分类学地位提供依据。
复苏步骤：
①冻存管从液氮或-80℃冰箱中取出放入PE手套中，迅速没入37℃水浴锅，摇晃冻存管加速溶解，以1min内全部溶解为宜；
②在超净台中将溶解好的细胞液加入到装有9mL完全培养基的离心管内，1000-1200rpm离心5min，弃去上清液，用1-2mL完全培养基重悬细胞。
③将细胞悬液加入到含有5-6mL完全培养基的T25瓶中，放入培养箱培养。
细胞传代：
①将旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入1-2mL胰酶（0.25%Trypsin+0.02%EDTA）；
②镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（可用吸管吸起些许胰酶轻轻吹打细胞层某处，肉眼可见细胞层脱落，即消化完成，否则继续消化），直接吸掉胰酶，加入5-6mL完全培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。
③将细胞悬液按1:2比例分到新的T25瓶中，添加适当的完全培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。；
④注意培养基pH值变化和细胞密度，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%-90%时，重复传代操作或者冻存。
提供STR鉴定报告
一、收到细胞处理方法
1. 收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置若干小时（视细胞密度而定）稳 定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收 细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下 细胞状态，100×，200×各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方 进行售后的依据。
2. 收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费重发一次细胞。
3. 由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素的影响，故本公司只保证客户收到细胞 后一周内的细胞状态，故客户需要售后是需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和 发现问题后与客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7 天。
4. 如客户对细胞的种类、纯度、活性等特性有疑问，需提供相应的生物学实验检测结果作 为依据。
二、细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？
1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；
2. 细胞污染问题，请在收到产品48 小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；
3. 常温发货的细胞静置24 小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24 小时后，绝大多数细胞 未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；
4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24 小时后或常温发货的细胞静置4 小时候并且未开封，出现 污染，重发；
5. 细胞活性问题，请在收到产品7 天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定 细胞活力，核实后予重发；
6. 细胞收到当天以及第2,3 天请拍照，3 天未告知的，视为产品合格。4-7 天内出现问题有 提供收到细胞前3 天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术 人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方 进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。
细胞产品的售后政策
1、收到细胞24小时内出现细菌、真菌、霉菌污染，72小时检测支原体阳性无条件重发;
2、享有1个月的超长售后免责期;,
培养条件RPMI1640培养基；10%胎牛血清；1%双抗