流式JC-1检测

提供商 ：伊莱博生物科技（上海）有限公司

服务名称 ：细胞实验技术服务

1、JC1线粒体膜电位的检测原理
线粒体膜电位是指线粒体内膜两侧的电位差，它是细胞能量代谢的关键指标之一。JC1是一种常用的线粒体膜电位检测染料，其原理是基于JC1 在不同浓度下呈现出不同的荧光颜色。
JC1 有单体和多聚体两种存在状态。在低浓度时，JC1 以单体存在，此时可以检测到绿色荧光。在流式检测中，通常使用 FL-1通道（与 FITC通道）进行检测。当 JC1 浓度较高时，它会以多聚体形式存在，此时可以检测到红色荧光。在流式检测中，通常使用FL-2通道进行检测
2、JC1的检测方法
流式细胞仪检测是一种快速、高效的检测方法。在实验中，将细胞与JC1染料共同培养，然后用流式细胞仪检测细胞中 FL-1 和FL-2 通道的荧光强度，从而得到线粒体膜电位的值。

JC-1线粒体膜电位荧光探针染色步骤（流式细胞仪法）：

1. 于6-，12或24-孔板上进行细胞铺板，密度为5×105 cells/mL。37℃，5% CO2培养箱培养过夜。选择合适的化合物根据特定的步骤进行凋亡诱导。 注：进行凋亡诱导时的细胞密度建议不超过1×106 cells/mL，也可根据自己的细胞类型培养至合适的密度。
2. 取0.5 mL细胞悬液至无菌的离心管内；
3. 室温条件400 x g离心5 min；吸掉上清。
4. 用0.5 mL JC-1工作液重悬细胞，于37℃，5%CO2培养箱孵育15-30 min；注意：一般情况，15 min足以进行充分的染色。
5. 室温条件400 x g离心5 min；吸掉上清；
6. 用2 mL细胞培养液或者缓冲液重悬细胞，之后室温条件400 x g离心5 min；吸掉上清；
7. 重复步骤6）；
8. 用0.5 mL新鲜培养液或者缓冲液重悬细胞，即可进行后续的流式分析。注意：请马上进行流式定量分析，此细节很重要。
数据分析：含有红色JC-1聚集物的健康细胞线粒体用FL2通道检测；含有绿色JC-1单体的凋亡或不健康细胞用FL1（FITC）通道检测。