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文献和实验
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库存 ：大量
英文名 ：pSIH1-CMV-Puro-H1-MIF-shRNA1/2/3（三保一慢病毒套餐）
CAS号 ：00007
保质期 ：1年
供应商 ：上海瓦兰生物
保存条件 ：-20°
规格 ：1ml
基因干扰MIF，pSIH1-CMV-Puro-H1-MIF-shRNA1/2/3（三保一慢病毒套餐）
规格：1ml
辅助试剂的选择
Polybrene可以促进病毒对细胞的侵染， 但在少数情况下它对细胞有伤害。 有的细胞对Polybrene的毒理
Polybrene可以促进病毒对细胞的侵染， 但在少数情况下它对细胞有伤害。 有的细胞对Polybrene的毒理
反应明显， 因此细胞感染时是否适合Polyb「ene需要摸索；不同细胞对Polybrene的敏感度不同， 可以用
1 ～ 10 µ g/ml的范围筛选合适的浓度， 以24h 内细胞无明显毒性反应为佳， 过长时间暴露于Polybrene可对某些
细胞产生毒性作用。 可参考文献并进行预实验摸索， Polybrene最常用的工作浓度为6 ～ 8 µ g/ml。 一般我们推
荐使用浓度为8 µ g/ml。如果细胞 MOI 值比较低或者对感染效率要求不高， 建议不加任何感染辅助试剂。
感染贴壁细胞
感染贴壁细胞
a）将对数生长期的状态良好的细胞接种至所需培养器皿中， 控制细胞接种量使得次日病毒 感染时细胞汇合度 30-
50%。如果细胞增殖较快， 建议接种细胞密度为 30%， 如果细胞增殖较慢， 建议适当增加接种汇合度， 以病毒感染 72h 细
胞汇合度未超过 100%为标准。
b）感染当天， 取出细胞， 更换为含有合适浓度｛一般为8 µg /ml ) Polybrene 的新鲜完全培养基。
c）取出病毒于冰上解冻。 根据 MOI 及病毒滴度加入相应的病毒量， 可先用完全培养基稀释。 加入病毒后轻柔 “ 8 ” 字
混匀。 当培养器皿底面积较大时， 为增加病毒与细胞接触的几率， 感染时可适量减少培养基体积。 下表为不同细胞培养体
系推荐的感染体积及病毒用量｛病毒滴度为1×108 TU/ml ）。
d) 37℃培养12-16h， 更换为完全培养基， 继续培养。 如细胞状况发生明显变化， 可于感染后8h换液， 保证细胞的正
常生长。
e）继续培养。 期间观察细胞， 若液体变黄， 可对细胞换液维持细胞活性。
f）感染后72h （ 一般代谢较旺盛的细胞或慢病毒包装容量48h即可观察到荧光， 代谢较慢的细胞可能需要96h甚至更长
时间才能观察到荧光），观察感染效率。 如果需要筛选稳定细胞株， 可以根据预实验选用合适的抗生素及合适的工作浓度
进行筛选。
上海瓦兰生物科技有限公司
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