人 CIK 细胞高效扩增试剂盒

库存 ：大量

英文名 ：Human CIK cell robust expasion kit

保质期 ：12 个月

供应商 ：北京百奥创新科技有限公司

保存条件 ：2-8°C

规格 ：具体价格请咨询客服

产品名称：人 CIK 细胞高效扩增试剂盒

产品简介：细胞因子诱导杀伤性细胞（CIK 细胞）是一个异质细胞群，包含 CD3+CD56+NK 样 T 细胞和CD3+CD8+细胞毒性杀伤作用 T 细胞，具有杀伤肿瘤具有 MHC 限制性和非 MHC 限制性的特点， CIK 细胞对各种肿瘤尤其是对低表达 MHC Ⅰ Ⅱ分子更有效。 本试剂盒可以从单个核细胞（MNC）在体外高效扩增成 CIK 细胞，为免疫学研究提供了一个有力工具。
储存条件与效期：CIK-I 因子，CIK-II 因子与 CIK 细胞无血清培养基均需 2-8°C 避光保存。有效期为 12 个月。 生产日期，有效期至：见标签
操作步骤：
血浆的提取与保存：
注意：
1）禁止使用 EDTA 抗凝的血样，因为 EDTA 会极大影响 CIK 细胞的激活与增殖；
2）所取血样最好不超过 12 小时，因为血样的时间越长，所提取的单个核细胞中杂细胞越多， 且单个核细胞的活性会降低。
1.将取到的 50-60mL 外周血置于 50mL 离心管中，室温下 650g，离心 15min；
2.取上层黄色血浆部分于新的 50mL 离心管中（下层为血液细胞成分，用于后续单个核细胞的提 取）；
3.将血浆置于 56°C 水浴锅中灭活 30min；
4.血浆灭活完毕后，可见血浆呈现浑浊状，900g，离心 10min；
5.取上清，于 4°C 保存待用。
单个核细胞的提取：
1.取血浆提取步骤的下层红色细胞沉淀，加入生理盐水或 PBS 至原体积；
2.取 2 支 50mL 离心管，分别加入 15mL 淋巴细胞分离液，并将 1 步骤中的稀释血液分别缓缓 铺加到淋巴细胞分离液的上层；
注意：
铺加血样时建议速度适中，尤其是刚开始时的铺加， 避免破坏淋巴细胞分离液与血样的界面。
3.室温下，800g 离心 20min（升速 1-5，无闸减速）；
注意：过快的升速会减少后续单个核细胞的收获量
4.离心后，离心管中样品由上到下分为 4 层：血浆层-白膜层-人淋巴细胞分离液层-红细胞与粒 细胞的沉淀。分别小心吸取白膜层及其以下约一半的液体于新的离心管中，并加入生理盐水或 PBS 至 40mL 体积，混匀，300g 离心 10min；
5.弃上清，沉淀再次用 40mL 的生理盐水或 PBS 重悬，300g 离心 10min；
注意：对于血小板较多的样本可重复 5 步骤 1-2 次。
6.弃上清，沉淀用少许 CIK 细胞无血清培养基重悬，合并，取部分细胞悬液计数，备用。
单个核细胞接种与补液：
1.第 0 天，配制 50mL CIK 细胞完全培养基：CIK 细胞无血清培养基 45mL，10%已热灭活的自体血浆（5mL），CIK-I 100μL，CIK-II 100μL 以及终浓度为 1000IU/mL 的 IL-2。将制备好的单 个核细胞（MNC）按 1.5M cells/mL 的细胞密度接种于 50mL 已配制好的 CIK 细胞完全培养基中， 混合均匀后转移至 T75 瓶中，而后将 T75 瓶转移至 5%二氧化碳培养箱 37°C 培养；
注意：
1）每支 IL-2 使用 1mL CIK 细胞无血清培养基溶解后，可存于 2-8°C 冰箱，存放时间不超 过 1 周。建议将 IL-2 溶解后分装于无菌试剂管后保存于-20°C 冰箱，使用时溶解即可，注意不要反复冻融，且不可使用长期置于 2-8°C 的 IL-2，否则将严重影响本试剂盒的扩增效果；
2）CIK 细胞无血清培养基在使用前，需先将其室温平衡 30min 以上，切勿将培养基直接从冰 箱中拿出使用，否则可能导致细胞出现应激反应。
2.第 3 天（3×24h），补加 CIK 细胞无血清培养基 95mL，5%已热灭活的自体血浆（5mL）以 及 IL-2（IL-2 终浓度为 1000IU/mL），转入细胞培养袋，此时培养袋含 150mL 培养基；
注意：
1）为使更多的细胞转入到培养袋中，可先将 T-75 瓶中的细胞吹打均匀，全部转入培养袋中， 再用部分新鲜配制的培养液润洗培养瓶，并再次转入培养袋中，最后补齐培养液即可；
3.第 5 天，补加 CIK 细胞无血清培养基 150mL，1%已热灭活的自体血浆 1.5mL 以及 IL-2（IL-2 终浓度为 1000IU/mL），此时袋子含 300mL 培养液；
4.第 7 天，补加 CIK 细胞无血清培养基 300mL，剩余的所有自体热灭活血浆以及 IL-2（IL-2 终 浓度为 1000IU/mL），然后分成两袋，此时每个袋子约含 300mL 培养液；
5.第 9 天，分别往每个培养袋补加 CIK 细胞无血清培养基 300mL 以及 IL-2（IL-2 终浓度为 1000IU/mL），此时每个袋子约含 600mL 培养液；
6.第 11 天，分别往每个培养袋补加剩余 CIK 细胞无血清培养基以及 IL-2（IL-2 终浓度为 1000IU/mL），此时每个袋子约含 1000mL 培养液；
7.第 13-14 天，收获 CIK 细胞。