人脑型肌酸激酶(CKB)ELISA试剂盒

供应商 ：上海笃玛生物科技有限公司

库存 ：现货

样本 ：血清 血浆 尿液 组织 脑脊液等

适应物种 ：人

应用 ：科研实验

检测方法 ：ELISA

检测限 ：电询

规格 ：96T/48T

人脑型肌酸激酶(CKB)ELISA试剂盒 

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人E-Cad抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人E-Cad与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入E-Cad抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人E-Cad抗体与结合在包被抗体上的人E-Cad结合、亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，人E-Cad浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中人E-Cad的浓度。


样品收集:
1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。
2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。
5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测
6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。
7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。
8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。

什么时候进行ELISA测试时需要准备一系列稀释样本?
1)未知样本浓度:当你不知道样本中抗原或抗体的浓度时，准备一系列稀释样
可以帮助确保至少有一些稀释度落在ELISA的线性检测范围内。
2)避免信号饱和:对于浓度较高的样本，稀释可以防止信号饱和，即吸光度值超
出光度计的最大读数，从而保证结果的线性和准确性。
3)减少高剂量挂钩效应:在某些情况下，过高的抗原浓度会导致检测抗体无法形
成“夹心”结构，反而降低了检测信号，这称为“挂钩效应”。稀释样本可以避免这一
现象。
4)优化检测条件:为了找到最佳的检测条件和稀释度，初步实验通常会涵盖广泛
的稀释范围，以便后续实验可以直接使用最佳稀释度。
5)建立标准曲线:对于定量ELISA，需要使用一系列已知浓度的标准品来建立标准
曲线，未知样本的结果将与此曲线比较以确定其浓度。
6)控制非特异性结合:稀释样本可以减少非特异性结合，这种结合可能在高浓度
样本中更为常见。
7)实验重复性和可比性:为了确保实验的重复性和可比性，对于不同时间点或不
同实验条件下的样本，通常需要准备相同的稀释系列。
8)特殊样本类型处理:某些样本类型(如血清、血浆或含有抑制剂的样本)可能
需要稀释以减少背景干扰或抑制剂的影响。


人脑型肌酸激酶(CKB)ELISA试剂盒 

试验所需器材:
1. 酶标仪(450nm波长滤光片)
2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL
3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水
4. 吸水纸




样本处理
1.组织取出前尽量进行心脏灌流
2.组织表面不能有毛发等不相关组分
3.组织称重(mg)后立即放入EP管中
4.向EP管中加入9倍量的PBS (μL)
5.用匀浆机进行组织匀浆
6.离心
7.小心吸取上清

结果判断:
1.以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。
2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。