文献支持酮体含量检测试剂盒（血清、血浆、尿液等） 紫外分光光度法

保存条件 ：-20°C

保质期 ：6个月

英文名 ：Ketone Body Content Assay Kit

库存 ：999

供应商 ：北京索莱宝科技有限公司

CAS号 ：BC5060-50T/48S

规格 ：50T/48S

酮体含量检测试剂盒（血清、血浆、尿液等）说明书

紫外分光光度法

货号：BC5060

规格：50T/48S

产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称	规格	保存条件
试剂一A液	液体55mL×1瓶	2-8℃保存
试剂一B液	液体55mL×1瓶	2-8℃保存
试剂二A液	粉剂×2支	-20℃保存
试剂二B液	粉剂×2支	-20℃保存
试剂三	粉剂×3支	-20℃保存
标准品1	粉剂×1支	2-8℃保存
标准品2	粉剂×1支	-20℃保存

溶液的配制：

1、 试剂二A液：临用前取一支加入1.2mL蒸馏水，充分溶解。用不完的试剂分装后-20℃可保存3周。避免反复冻融；

2、 试剂二B液：临用前取一支加入600μL蒸馏水，充分溶解。用不完的试剂分装后-20℃可保存3周。避免反复冻融；

3、 试剂三：临用前取一支加入400μL蒸馏水，充分溶解。用不完的试剂分装后-20℃保存，可以保存3周。避免反复冻融；

4、 标准品1：8mg 3-羟基丁酸钠。临用前加入0.98mL蒸馏水，充分溶解，即8mg/mL 3-羟基丁酸钠标准溶液，2-8℃可以保存4周。临用前根据试验所需量用蒸馏水稀释成0.2mg/mL标准溶液待用，即为标准溶液1；

5、 标准品2：8mg乙酰乙酸锂。临用前加入0.95mL蒸馏水，充分溶解，即8mg/mL乙酰乙酸锂标准溶液，-20℃可以保存4周。临用前根据试验所需量用蒸馏水稀释成0.05mg/mL标准溶液待用，即标准溶液2；

6、 BOH工作液配制：临用前根据试验所需量将试剂一A液、试剂二A液 、试剂三按照850μL:40μL:10μL（共900μL，1T的量）的比例配成工作液，充分混匀，置于37℃保温15min（此步骤不可省略），现用现配，工作液在4h内用完；

7、 AcAc工作液配制：临用前根据试验所需量将试剂一B液、试剂二B液、试剂三按照870μL:20μL:10μL（共900μL，1T的量）的比例配成工作液，充分混匀，置于37℃保温15min（此步骤不可省略），现用现配，工作液在4h内用完。

产品说明：

酮体是肝脏脂肪酸氧化分解的中间产物乙酰乙酸（AcAc）、β-羟丁酸（BOH）及丙 酮三者统称。酮体中丙 酮的生成量相当小，生成后即被吸收。乙酰乙酸和β-羟丁酸则经血流进入肝外组织，在此被氧化，经柠檬酸循环提供更多能量给那些组织使用，例如骨、心肌和肾皮质。

 

在pH 7.0和37℃条件下，BOH在β-羟丁酸脱氢酶（HBDH）催化下脱氢生成乙酞乙酸，同时NAD⁺被还原成NADH；在pH 8.8和37℃条件下，AcAc被HBDH还原为3-羟基丁酸酯或脱羧生成丙 酮，同时NADH被氧化成NAD⁺，NADH在340nm波长下有特征吸收峰，通过检测在340nm波长下的吸光值变化可以计算出BOH和AcAc的含量，从而计算出样本中酮体的含量。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、低温离心机、可调式移液器、水浴锅/恒温培养箱、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

血清（浆）、尿液等液体样本：直接测定。（若有浑浊可以离心取上清后测定）

二、测定步骤

1、 紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，用蒸馏水调零。

2、 BOH含量测定：

试剂名称（μL）	测定管	标准管	空白管
样本	100
标准溶液1		100
蒸馏水			100
BOH工作液	900	900	900
将上述溶液依次加入适1mL石英比色皿中，充分混匀20s，记录340nm处20s时吸光值ABOH样本1、ABOH标准1、ABOH空白1，37℃水浴锅或者培养箱反应5min，反应后拿出迅速擦干测定5min20s时吸光值ABOH样本2、ABOH标准2、ABOH空白2。计算ΔABOH样本=ABOH样本2-ABOH样本1，ΔABOH标准=ABOH标准2-ABOH标准1，ΔABOH空白=ABOH空白2-ABOH空白1。    空白管和标准管只需做1-2次。

 

3、 AcAc含量测定：

试剂名称（μL）	测定管	标准管	空白管
样本	100
标准溶液2		100
蒸馏水			100
AcAc工作液	900	900	900
将上述溶液依次加入1mL石英比色皿中，充分混匀20s，记录340nm处20s时吸光值AAcAc样本1、AAcAc标准1、AAcAc空白1，37℃水浴锅或者培养箱反应5min，反应后拿出迅速擦干测定5min20s时吸光值AAcAc样本2、AAcAc标准2、AAcAc空白2。计算ΔAAcAc样本=AAcAc样本1-AAcAc样本2，ΔAAcAc标准=AAcAc标准1-AAcAc标准2，ΔAAcAc空白=AAcAc空白1-AAcAc空白2。    空白管和标准管只需做1-2次。

 

三、酮体含量计算

1、 BOH计算公式

BOH含量（μmol/mL）=(ΔA_BOH样本-ΔA_BOH空白)÷(ΔA_BOH标准-ΔA_BOH空白)×C_BOH÷126.09×1000

=1.586×(ΔA_BOH样本-ΔA_BOH空白)÷(ΔA_BOH标准-ΔA_BOH空白)

2、 AcAc计算公式

AcAc含量（μmol/mL）=(ΔA_AcAc样本-ΔA_AcAc空白)÷(ΔA_AcAc标准-ΔA_AcAc空白)×C_AcAc÷108.02×1000

=0.463×(ΔA_AcAc样本-ΔA_AcAc空白)÷(ΔA_AcAc标准-ΔA_AcAc空白)

3、 酮体计算公式

酮体含量（μmol/mL）= BOH含量+ AcAc含量

C_BOH：BOH标准溶液1浓度，0.2mg/mL；C_AcAc：AcAc标准溶液2浓度，0.05mg/mL；126.09：3-羟基丁酸钠的分子量，126.09mg/mmol；108.02：乙酰乙酸锂的分子量，108.02mg/mmol；1000：单位换算系数，1mmol= 1000μmol。

注意事项：

1. 如果测定初始吸光值＞1.5或ΔA＞0.2，建议将样本用蒸馏水稀释后再测定。计算公式中乘上稀释倍数；

2. 如果ΔA接近空白值，建议加大样本量，同时保证反应体系总体积不变，相应减少工作液加样量后测定。例如，若增大样本量为200μL，则工作液调整为800μL。标准管与样本管加样体系应保持一致，计算公式不变。

实验实例：

取100μL牛血清按上述步骤进行实验，用1mL石英比色皿测定后进行计算ΔA_BOH样本=A_BOH样本2-A_BOH样本1= 0.095-0.056=0.039，ΔA_BOH标准=A_BOH标准2-A_BOH标准1=0.175-0.024=0.151，ΔA_BOH空白=A_BOH空白2-A_BOH空白1= 0.008-0.005=0.003，ΔA_AcAc样本=A_AcAc样本1-A_AcAc样本2=0.639-0.634=0.005，ΔA_AcAc标准=A_AcAc标准1-A_AcAc标准2= 0.586-0.447=0.139，ΔA_AcAc空白=A_AcAc空白1-A_AcAc空白2=0.696-0.695=0.001。计算
  BOH含量（μmol/mL）=1.586×(ΔA_BOH样本-ΔA_BOH空白)÷(ΔA_BOH标准-ΔA_BOH空白)=0.369μmol/mL

AcAc含量（μmol/mL）=0.463×(ΔA_AcAc样本-ΔA_AcAc空白)÷(ΔA_AcAc标准-ΔA_AcAc空白)=0.0134μmol/mL

酮体含量（μmol/mL）= BOH含量+ AcAc含量=0.383μmol/mL。

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