文献支持过氧化氢酶（CAT）活性检测试剂盒（钼酸铵法） 可见分光光度法

保存条件 ：2-8°C

保质期 ：6个月

英文名 ：Catalase (CAT) Activity Assay Kit （Ammonium Molybdate-Chromogenic Method）

库存 ：999

供应商 ：北京索莱宝科技有限公司

CAS号 ：BC4780-50T/24S

规格 ：50T/24S

过氧化氢酶（CAT）活性检测试剂盒说明书（钼酸铵法）
可见分光光度法
货号：BC4780
规格：50T/24S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体50mL×1瓶	2-8℃保存
试剂一	液体25mL×1瓶	2-8℃保存
试剂二	粉剂×2瓶	2-8℃保存
标准品	液体0.5mL×1瓶	2-8℃保存

溶液的配制：

1. 试剂二：临用前取1瓶试剂二加入17.5mL蒸馏水，充分溶解，用不完的试剂2-8℃保存一周。
2. 20μmol/mL标准液的配制：液体置于试剂瓶内EP管中，使用前需先离心。本试剂盒所提供标准品为1mmol/mL H₂O₂标准溶液，临用前取0.2mL标准品加入9.8mL试剂一稀释或者根据样本量按照比例配制，充分混匀，即为20μmol/mL标准液，现配现用。

产品说明：
CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是最主要的H₂O₂清除酶，在活性氧清除系统中具有重要作用。
H₂O₂可与钼酸铵反应形成稳定的黄色复合物，在405nm处有强烈吸收峰，且其吸光值大小与过氧化氢浓度成正比。通过测定反应体系中剩余的H₂O₂量，得出被CAT催化分解的H₂O₂量，进而反映CAT的活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、恒温水浴锅、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、细菌、细胞或组织样本的制备：
a、细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率200W，超声3s，间隔9s，重复30次）；8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
b、组织：按照组织质量(g) : 提取液体积(V)=1 : 5~10（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样本：直接检测。
二、测定步骤

1. 分光光度计预热30min以上，调节波长至405nm，蒸馏水调零。
2. 测定前将20μmol/mL标准液与试剂一在25℃水浴10min以上。
3. 加样表：

试剂名称	测定管	对照管	空白管	标准管
样本（μL）	60	60	-	-
提取液（μL）	-	-	60	60
20μmol/mL标准液（μL）	300	-	-	300
试剂一（μL）	-	300	300	-
混匀，25℃水浴锅中准确反应10min。
试剂二（μL）	540	540	540	540
混匀，室温静置10min，于1mL玻璃比色皿中测定405nm处吸光值，分别记为A测定、A对照、A空白、A标准。计算ΔA测定=A测定- A对照，ΔA标准=A标准- A空白，ΔA=ΔA标准-ΔA测定。空白管和标准管只需做1-2次。

• CAT活性计算

1、血清（浆）CAT活力的计算：
单位的定义：在25℃条件下，每mL血清（浆）每分钟催化1μmol H₂O₂降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/mL)=（ΔA÷ΔA标准）×20×V标准÷V样÷T×F=10×（ΔA÷ΔA标准）×F
2、组织、细菌或细胞中CAT活力计算：
1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：在25℃条件下，每mg组织蛋白每分钟催化1μmol H₂O₂降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/mg prot)=（ΔA÷ΔA标准）×20×V标准÷（Cpr×V样）÷T×F=10×（ΔA÷ΔA标准）÷Cpr×F
2）按样本质量计算：
单位的定义：在25℃条件下，每g组织每分钟催化1μmol H₂O₂降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/g 质量)=（ΔA÷ΔA标准）×20×V标准÷（V样÷V样总×W）÷T×F=10×（ΔA÷ΔA标准）÷W×F
3） 按细菌或细胞数量计算：
单位的定义：在25℃条件下，每1万个细菌或细胞每分钟催化1μmol H₂O₂降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/10⁴ cell)=（ΔA÷ΔA标准）×20×V标准÷（V样÷V样总×500）÷T×F=0.02×（ΔA÷ΔA标准）×F
20：标准品浓度，20μmol/mL；V标准：加入标准液体积，0.3mL；V样：加入样本体积，0.06mL；T：反应时间，10min；F：样本稀释倍数；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。
注意事项：

1. 本试剂盒多给出25mL的提取液，供样本稀释使用。
2. 如果反应液有大量气泡产生，将样本用提取液稀释后再进行测定。
3. 如果样本量过多，为保证反应时间（25℃，10min）的准确性，建议分成若干批次检测，每批次检测均需配1-2个空白管与标准管。
4. 当A测定小于0.12或者约等于A对照时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定。
5. 动物组织如肝脏、肾脏等酶活性较高样本，预实验建议将样本用提取液多个高倍稀释（如25倍、50倍、100倍等）试验后，再进行检测。

实验实例：

1. 取0.1g小鼠肝脏加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清用提取液稀释400倍后按照测定步骤操作，用玻璃比色皿测得计算ΔA标准=A标准-A空白=0.929-0.104=0.825，ΔA测定=A测定-A空白=0.301-0.109=0.192，ΔA=ΔA标准-ΔA测定=0.825-0.192=0.633。按样本质量计算酶活得：

CAT酶活(U/g质量)=10×（ΔA÷ΔA标准）÷W×F=10×（0.633÷0.825）×400÷0.1=30690.91 U/g 质量。
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