组化双染试剂盒

库存 ：现货

英文名 ：IHC DoubleStain Kit

CAS号 ：-

保质期 ：4°C保存，此外红色显色试剂-20°C保存，有效期1年

供应商 ：爱必信(上海)生物科技有限公司

保存条件 ：4°C保存，此外红色显色试剂-20°C保存，有效期1年

规格 ：50T

产品描述
描述	原理： 一抗识别抗原，HRP标记二抗识别一抗，HRP催化中间体TY永久性标记抗原且实现信号放大，红色色原特异性识别TY产物（共价结合），从而实现了红色信号的累积，完成了红色显色.常规免疫组化染色用DAB，形成棕色物质。DAB棕色+红色，形成了独特的组化双染颜色，该组化双染信号可以中性树胶封片，不同于传统的碱性磷酸酶AEC或AP-red等红色信号（不能中性树胶封片）。 试剂盒组分： 组分 规格 红色显色试剂 TY 8mL PB 8mL AC 4mL CU 600uL 红色 30uL DAB显色液 DAB色原（100×） 110uL DAB buffer 6mL 多聚体HRP二抗 11mL 抗体稀释液 11mL 3%过氧化氢 11mL
使用方法	红色显色使用方法：HRP二抗孵育完毕，加入即用型TY反应20min左右，PBS洗三次，之后加入红色显色液工作液(PB:CU:红色色原:AC=860:40:1:100)，反应15min以上（注：以上试剂使用之前解冻恢复为液体状态，必要时混匀，离心） 自备试剂：PBS、修复液、苏木素等 操作步骤： 1. 石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min ——二甲苯Ⅱ15min——无水乙醇Ⅰ5min——无水乙醇Ⅱ5min——85%酒精5min——75%酒精5min——蒸馏水洗。 2. 抗原修复：组织切片置于盛满EDTA抗原修复缓冲液（PH8.0）的修复盒中于微波炉内进行抗原修复，中火8min至沸，停火8min保温再转中低火7min，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片；也可以用其他抗原修复方式，比如：95°C水浴25min或者高压等。自然冷却后将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。 3. 阻断内源性过氧化物酶：切片放入3%过氧化氢溶液，室温避光孵育25min，将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。 4. BSA/封闭液封闭：切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈（防止抗体流走），在圈内滴加用3%BSA均匀覆盖组织，室温封闭30min。 5. 加一抗：轻轻甩掉封闭液，在切片上滴加按一抗说明书推荐比例配好的第一指标一抗，切片平放于湿盒内4°C孵育过夜。（湿盒内加少量水防止抗体蒸发） 6. 加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗（HRP标记）覆盖组织，室温孵育50min。 7. DAB显色：将DAB与DAB buffer按1：100配制成工作液，玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加新鲜配制的DAB工作液，显微镜下控制显色时间，阳性为棕黄色，自来水冲洗切片终止显色。 8. 抗原修复：组织切片置于盛满EDTA抗原修复缓冲液（PH8.0）的修复盒中于微波炉内进行抗原第二次修复。中火8min，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。也可以用其他抗原修复方式，比如：95°C水浴25min或者高压等。自然冷却后将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。(修复液和修复条件根据组织来确定） 9. BSA/封闭液封闭：切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈（加固防止抗体流走），在圈内滴加用3%BSA均匀覆盖组织，室温封闭30min。 10. 加一抗：轻轻甩掉封闭液，在切片上滴加PBS按一抗说明书推荐比例配好的第二指标一抗，切片平放于避光湿盒内4°C孵育过夜。（湿盒内加少量水防止抗体蒸发） 11. 加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗（HRP标记）覆盖组织，室温孵育50min。 12. 红色显色：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加解冻的TY反应液反应20min，PBS洗三次，之后加入红色显色液工作液(PB:CU:红色色原:AC=860:40:1:100)反应15min，显微镜下可控制显色时间，阳性为红色，自来水冲洗切片终止显色。 13. 复染细胞核：用苏木素#abs9214复染细胞核。 14. 脱水封片：将切片依次放入75%酒精6min——85%酒精6min——无水乙醇Ⅰ6min——无水乙醇Ⅱ6min——二甲苯Ⅰ5min中脱水透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干，中性树胶封片。 15. 显微镜镜检，图像采集分析。 16. 石蜡切片免疫组化结果判读：苏木素染细胞核为蓝色，第一指标DAB显出的阳性表达为棕黄色，第二指标红色显色的阳性表达为红色或粉红色。
储存/保存方法	4°C保存，此外红色显色试剂-20°C保存，有效期1年。
注意事项	1. DAB显色尽量不要过深，过深会影响红色显色结果。 2. 双染的两个抗原尽量表达位置不同（如标记不同细胞或者不同表达位置），不适用于两个抗原的共定位（不同于荧光的共定位）。 3. 红色显色抗原所对应的一抗抗体浓度适当提高一些，组化二抗应使用高敏多聚二抗。 4. 可以第一标红色，第二标棕色。

实验结果图：