Organoid ATP Viability Assay Kit

Organoid ATP Viability Assay Kit

价格: ¥900 - 4200

品牌:爱必信(absin)

货号:abs50059

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库存 :现货

英文名 :Organoid ATP Viability Assay Kit

CAS号 :-

保质期 :2-8℃,避光,有效期12个月。

供应商 :爱必信(上海)生物科技有限公司

保存条件 :2-8℃,避光,有效期12个月。

规格 :10mL/100mL

产品描述  
描述 本品是专门为类器官活性检测研发的ATP检测试剂盒,其发光技术原理是荧光素酶以荧光素、三磷酸腺苷(ATP)和 O2 为底物,在 Mg2+ 存在时,能将化学能转化为光能。ATP 既是荧光素酶催化发光的必需底物,又是所有生物生命活动的能量来源。在荧光素酶催化的发光反应中,ATP 在一定的浓度范围内,其浓度与发 光强度呈线性关系。

本试剂盒采用生物发光(bioluminescent)法,利用 Firefly luciferase(萤火虫荧光素酶)催化底物—— 荧光素的转化,高效利用 ATP 的能量,发射出光子。发光信号与存在的 ATP 量呈正比,而 ATP 与存在于类器官中的细胞数目直接呈正比。


本试剂盒为多孔板而设计,是进行自动化高通量筛选(HTS) ,类器官增殖和毒性分析的理想选择。均质检测步骤就是将单一试剂直接加入含有类器官培养基的孔板中,无需去除基质胶。

均质检测的"加样-混合-检测" 的操作方案使得类器官裂解和产生的发光信号与存在的 ATP 量成正比,而 ATP 量直接与类器官中的细胞数量成正比。独特的均质检测方案避免了那些 需要多个步骤的 ATP 检测方法可能会引入的误差。

产品组成:
组分 10mL 100mL 保存方法
Organoid ATP 荧光染料 1支 10支 2-8℃,避光
Organoid ATP 染料buffer 10mL 10×10mL 2-8℃,避光
注意:产品建议现配现用

产品特点:
(1)简化了类器官活性检测步骤:均质的"加样-混合-检测"方案减少了其它同类检测所需的操作步骤。
(2)类器官用量更少:可准确地检测到低于常用的比色法和荧光法的检测低限的细胞数。减少了每个检测反应所需的细胞数。
(3)迅速获得结果:加入试剂后 10 分钟就能获得数据。
(4)可自行选择检测方案:可用于多种类型的多孔板操作。可用发光检测仪或 CCD 成像设备记录数据。
(5)可连续处理培养板:发光信号稳定,样品可进行批量处理。
使用方法 1、类器官的准备:
使用适合进行化学发光检测的 96 孔板( 底和盖子透明,孔壁不透,推荐货号:abs7242),每孔接种5ul-10ul类器官基质胶混悬物,放培养箱半小时以上,待凝固后加入100ul类器官培养基(如使用 384 孔板,每孔接种2.5μl-4μl类器官基质胶混悬物,具体用量视不同类型的 384 孔板而定),并确保检测时每孔的细胞数量在 5 万个以内(如使用 384 孔板宜控制在 1 万个以内),同时设置不含类器官的基质胶培养液孔作为阴性对照,按照类器官培养的常规方法培养类器官。如有需要,可加入药物处理类器官。此外,如有必要,也可以设置类器官的浓度梯度,以便后续确定试剂盒的使用效果。

2、试剂准备:
1管冻干粉加入1管10ml buffer里,混匀避光待用。
注:溶解后尽快使用,-80℃,避光保存,有效期一个月
(1)溶解 Organoid ATP 发光法检测试剂,如有必要可适当分装该试剂。
(2)按照 96 孔板每孔 100μl (384 孔板每孔 25μl)   的量,取适量 Organoid ATP  发光法检测试剂,平衡至室温。

3、类器官活力检测:
(1)取出类器官培养板在室温平衡 10 分钟(通常不宜超过 30 分钟)。
(2)将96孔板每孔里的类器官培养基去除,每孔加入 100μl Organoid ATP 发光法检测试剂(384 孔板每孔 25μl)。
注:无需去除基质胶。
(3)室温剧烈振荡(微孔板恒温振荡器,推荐货号:abs72034 )5min使类器官充分裂解。 
(4)室温(约 25℃)孵育 10 分钟,使发光信号趋于稳定。
(5)使用具有检测化学发光功能的多功能酶标仪进行化学发光检测。请根据仪器要求设置相应的参数,每个孔的检测时间一般为 0.25- 1 秒或更长时间,具体需根据仪器的检测灵敏度 进行适当的调整。
(6)根据化学发光读数直接计算类器官的相对活力,或根据 ATP 标准曲线计算出 ATP 的量从而 计算出类器官的相对活力。
注:检测效果因类器官的种类不同而有所不同,对于一些 ATP 含量特别高的类器官,在细胞数量达到 50,000 个后可能会不呈线性相关,但化学发光读数还是会继续升高。
储存/保存方法 2-8℃,避光,有效期12个月。
注意事项 1 、荧光素酶的活性对温度比较敏感,所以反应前类器官和检测试剂均需平衡至室温后再进行 测定。检测试剂请混匀后使用。
2 、本试剂盒的检测试剂中含有荧光素酶,反复冻融会导致其逐渐失活。为取得良好的使用 效果,第一次溶解后后可适当分装保存,但需注意分装的容器不能有 ATP 污染。
3 、待测药物的溶剂含量较高时可能会干扰荧光素酶反应,从而影响化学发光信号。可以通 过设置含有溶剂的类器官培养液对照孔排除溶剂的干扰。
4、检测时须使用适合于类器官培养的白色或黑色的 96 孔板或 384 孔板。如果使用普通透明的 96 孔板或 384 孔板,相邻孔之间会产生相互干扰。
5、本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品, 不得存放于普通住宅内。
6 、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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