产品详情
文献和实验
相关推荐
供应商 :信帆生物
库存 :100
克伦特罗检测试剂盒1、检测原理
本试剂盒是利用竞争ELISA方法,在酶标板微孔上预包被抗克伦特罗抗原。检测时,加入标准品或样品溶液,克伦特罗抗体及酶标记物,包被抗原和加入样本中的克伦特罗竞争性地与克伦特罗抗体结合后,再与酶标记物形成抗原抗体复合物,用TMB底物显色;加入反应终止液,在450nm波长酶标仪下进行检测,样品中的克伦特罗浓度与吸收光强度成反比。
2、检测范围
本试剂盒是应用ELISA技术研发的药物残留检测产品,与仪器分析技术比较,能经济、快速地检测出尿样、肌肉、肝脏及饲料等中的克伦特罗。
3、需要但试剂盒中不提供的器材和试剂
(1)设备
微孔板酶标仪(450nm)
振荡器
离心机
微量移液器:20μL~200μL,100μL~1000μL
容量瓶:100mL,500mL,1000mL
(2)试剂
氢-氧-化钠、浓盐酸、乙酸乙酯
- 溶液的配制
配液1:0.1M盐酸溶液
量取0.86mL浓盐酸加去离子水混匀定容至100mL
配液2:1M盐酸溶液
量取8.6mL浓盐酸加去离子水混匀定容至100mL
配液3:0.1M氢-氧-化钠溶液(组织样本)
称0.4gNaOH加去离子水混匀溶解,定容至100mL
配液4:1M氢-氧-化钠溶液(饲料样本)
称4.0gNaOH加去离子水混匀溶解,定容至100mL
配液5:-0.1M盐酸(组织样本)
与0.1M盐酸溶液按体积比84:16混匀
- 样本前处理方法
处理任何样本时,都须注意:
实验中必须使用一次性吸头,在吸取不同的试剂时要更换吸头。
实验之前须检查各种实验器具是否干净,必须使用洁净实验器具,以避免污染干扰实验结果。样本处理步骤:
尿样
- 尿样(若浑浊可以4000转/分 离心5分钟,取清亮部分),取20μL进行分析。
- 不用时应冷冻保存。
畜禽组织(鸡、鸭、猪肌肉/肝脏等)
- 称取2±0.05 g匀浆的样品于50mL离心管中,加入6mL-0.1M盐酸,振荡5分钟;室温4000转/分以上离心10分钟;
- 取上清3mL,加2mL 0.1M氢-氧-化钠溶液,6mL乙酸乙酯,振荡5分钟;室温4000转/分,以上离心10分钟;
- 取全部上清至干净玻璃试管中,于56℃水浴下氮气/空气吹干;
- 加1mL去离子水复溶,振荡30秒。
- 取20μL进行分析。
饲料
- 用食品粉碎机或乳钵研碎饲料样品,称5±0.05 g研碎的饲料样品,加10mL;用振荡器剧烈震荡5分钟,室温3000转/分离心5分钟;
- 取3mL上层清亮有机相至10mL干净的玻璃试管中,于50-60℃氮气流下吹干。
- 加入1mL正己烷,用涡旋仪涡旋30秒;再加入1mL去离子岁混合,用涡旋仪涡旋1分钟,3000转/分离心5分钟;去除上层正己烷相。
- 取下层20μL进行分析。
7、酶联免疫检测步骤
测定前须知:
- 使用之前将所有试剂和需用微孔板回升至室温。
- 使用之后立即将所有试剂放回2-8℃。
- 在使用中不要让微孔干燥。
- 在ELISA分析中的重复性,很大程度上取决于洗板的一致性,正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
- 在所有恒温孵育过程中,避免光线照射,用该板膜盖住微孔板。
- 将所需试剂从冷藏环境中取出,在室温下平衡30分钟,每种液体使用前均须摇匀。注意标准液均需做2个平行试验。
- 加标准液或样品液20μL到相应的微孔中,然后加20μL酶标记物,80μL抗体工作液,用膜盖好,25℃下避光反应30分钟。
- 洗板:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,加去离子水 250mL/孔,每次浸泡15~30秒,充分洗涤4~5次,用吸水纸拍干。
- 显色:每孔先各加入底物液A 50μL,再各加入底物液B 50μL,轻轻晃荡混匀,并在25℃下避光反应15分钟。
- 读数:每孔各加50μL终止液,在酶标仪于450nm处测定OD值(建议用450/630nm双波长检测,在5分钟内读完数据)。
所测得的标准液或样品吸光度的平均值(B)除以di一个标准液(0标准液)的吸光度(B<苏b>0)值再乘以100%,得到百分吸光度值。
百分吸光度值(%)=B/B<苏b>0 ×100%
以标准品浓度的10为底的对数为X轴, 百分吸光值为Y轴,绘制标准曲线。将样本的百分吸光值代入标准曲线,从标准曲线上读出样本所对应的值,作为10的幂,乘以稀释倍数,即为样品中所含克伦特罗的量。利用试剂盒专业分析软件进行计算,更便于大量样品的准确、快速分析。/
精密度:
试剂盒的变异系数均小于10%
10、注意事项
- 室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温(20-25℃)会导致所有标准的OD值偏低。
- 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
- 反应终止液为2M硫酸,避免接触皮肤。如不慎滴漏到皮肤上,请尽快用水冲洗。
- 不要使用过了有效日期的试剂盒;也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂,掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低;不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
- 保存试剂盒于2-8℃,不要冷冻,将不用的微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。
- 显色试剂有任何颜色表明发色剂变质,应当弃之。0标准的吸光度(450nm)值小于0.5(A450nm<0.5 )时,表示试剂可能变质。
- 在加入底物液后,一般显色15分钟即可。若颜色较浅,可延长反应时间到20分钟(或更长),但不得超过30分钟。反之,则减短反应时间。
- 该试剂盒佳反应温度为25℃,温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
贮藏条件:在2~8℃保存试剂盒
保存期:本试剂盒有效期为12个月。
克伦特罗检测试剂盒
上海信帆生物科技有限公司
品牌商实名认证
钻石会员
入驻年限:12年