T4 DNA连接酶（T4 DNA ligase）

价格： ￥400

品牌：CUSABIO 品牌认证

货号：CSB-DEM049

产品详情

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英文名：T4 DNA ligase

保质期：24个月

供应商：武汉益普生物科技有限公司

保存条件：-20 ±5 °C

规格：40000U

产品名称	T4 DNA 连接酶
来源	大肠杆菌重组表达
货号	CSB-DEM049
产品形态	液体
储存条件	-20 ±5°C
分子量	55.3kDa
质量控制	无核酸外切酶和核酸内切酶残留
有效期	24 个月

产品说明
T4 DNA Ligase(T4 DNA 连接酶) ，可以催化平末端或粘性末端双链 DNA 或 RNA 的 5'-P 末端和 3'-OH 末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需 ATP 作为辅助因子。同时 T4 DNA 连接酶可以修补双链 DNA、双链 RNA 或 DNA/RNA 杂合物上的单链缺刻。
本品适用于限制性内切酶酶切片段、Linker 或 Adapter 等的连接，也可以用于切刻修复及 Ligase 介导的 RNA 检测。

产品组分

组分编号	组分名称	规格	规格	规格
1	T4 DNA ligase (400U/μL)	40KU	80KU	400KU
2	10×T4 DNA Ligase Buffer	300μL	600μL	1.5mL*2

使用方法
1.在无菌微量离心管中配制以下反应体系：

组分	使用量
ddH2O	Up to 20 μL
10×T4 DNA Ligase Buffer	2 μL
T4 DNA ligase (400U/μL)	1 μL
载体 DNA	约 50- 100ng
插入片段	约载体摩尔数的 3 倍

注：平末端载体与 DNA 片段进行连接时，应先将载体进行去磷酸化处理，以防发生自连接现象。为提高连接效率，每 20 µL 反应体系中可以加 2 µL 50% PEG 4000。
2. 16℃反应过夜。
3.转化实验
1）将连接产物加入到 100 µL 感受态细胞中（连接产物不应超过感受态细胞的 1/10），轻弹混匀，冰上孵育 30 min。
2）将离心管于 42℃ , 热激 90 sec ，之后立刻置于冰水浴静置 2-3 min。
3）向离心管中加入 900 µL LB 或 SOC 培养基，37℃ , 220 rpm ，振荡培养 1h。
4）2500g 离心 5 min ，吸去 900 µL 上清，用剩余培养基重悬菌体，用无菌涂布棒将剩余菌体在正确抗性的平板上涂布均匀，待菌液被平板吸收后，37℃倒置培养过夜。