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文献和实验
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肿瘤类型 :否
供应商 :上海研生
库存 :49
生长状态 :贴壁
是否是肿瘤细胞 :否
细胞形态 :上皮样,多角形细胞
物种来源 :人
组织来源 :小肠组织
规格 :5×10⁵Cells/T25培养瓶
一、基本信息细胞名称 | 人小肠粘膜上皮细胞 | 组织来源 | 小肠组织 |
商品货号 | YS-01X8147 | 种属来源 | 人 |
包被条件 | 换液频率 | 每2-3天换液一次 | |
生长特性 | 贴壁培养 | 细胞形态 | 上皮样,多角形细胞 |
传代特性 | 细胞特性确定传代 | 消化液 | 0.25%胰蛋白酶 |
培养基 | 原代上皮细胞培养体系 | 培养条件 | 气相: 空气,95%;CO2 ,5% |
细胞简介 |
小肠位于腹中, 上端接幽门与胃相通,下端通过阑门与大肠相连, 是食物消化吸 收的主要场所。一般根据形态和结构变化将小肠分为三段,分别为十二指肠,空 肠和回肠。 小肠壁结构一般分4层,由外向内依次为:浆膜层, 平滑肌层,粘膜下 层和粘膜层。粘膜层又分为3层: 靠近粘膜下层的是一层平滑肌,称为粘膜肌层。 其次为结缔组织,又称为固有层。后面向肠腔的是一层柱状上皮细胞构成的粘 膜。小肠粘膜有纵行和横行皱襞,并有无数细小的指状突起, 称为绒毛。绒毛的 基底处粘膜内陷成管状, 称为利贝屈恩氏隐窝。隐窝基底部的上皮细胞不断地进 行有丝分裂,产生新细胞。隐窝上皮中还有许多杯状细胞,它分泌粘液,起滑润 食物和保护粘膜的作用。 |
质量检测:实验室分离的人小肠粘膜上皮细胞经CD31免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
人小肠粘膜上皮细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,人小肠粘膜上皮细胞以此保证该细胞的最佳培养状态。
二、细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片
三、使用方法
人小肠粘膜上皮细胞是一种贴壁细胞,细胞形态呈上皮样,多角形细胞 ,在技术部标准操作流程下,细胞可传2-3代;建议您收到细胞后尽快进行相关实验。客户收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,
37℃温浴1-3min;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入5ml完全培养基终止消化;
3)用吸管轻轻吹打混匀,按传代比例接种T25培养瓶传代,然后补充新鲜的完全培养基至5mL,置于37℃、5%CO2、饱和湿度
的细胞培养箱中静置培养;
4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
3. 细胞收货脱落
1)收集所有细胞悬液,1000rpm,离心5min,保留沉淀;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中,重悬沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min);消化完向离心管内
加入5ml完全培养基终止消化;
3)经1000rpm,离心5min,丢弃上清,用5ml完全培养基(补加1%FBS,促进贴壁)重悬沉淀,接种于新的培养瓶内;
4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。
4. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性,贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿(如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等)时,需要对实验
器皿进行包被,以增强细胞贴壁性,避免细胞因没贴好影响实验;包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚赖氨酸PLL
(0.1mg/ml),明胶(0.1%),依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
原代细胞培养方法及注意事项:
1.准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2.布局:点燃酒精灯,安装吸管帽。
3.处理组织:把组织块置于烧杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。
4.剪切:用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块,以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角烧瓶中,结扎瓶口或塞以胶塞。
5.消化:或用恒温水浴,或置于37℃温箱消化均可,消化中每隔20分钟应摇动一次,如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。
6.分离:在消化过程中见消化液发混浊时,可用吸管吸出少许消化液在镜下观察,如组织已分散成细胞团或单个细胞,立即终止消化,随即通过适宜不锈钢筛,滤掉尚未充分消化开的组织块。低速(500~1000转/分)离心消化液5分钟,吸出上清,加入适量含有血清的培养液。
7.计数:用计数板计数,如细胞悬液细胞密度过大,再补加培养液调整后,分装入培养瓶中。对大多数细胞来说,pH要求在7.2~7.4范围,培养液呈微红色,如颜色偏黄,说明液体变酸,可用NaHCO3调整。
8.培养:置于36.5℃温箱培养,如用CO2温箱培养,瓶盖需拧松半圈。
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