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文献和实验
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肿瘤类型 :否
供应商 :上海研生
库存 :50
生长状态 :贴壁
是否是肿瘤细胞 :否
细胞形态 :成纤维细胞样
物种来源 :人
组织来源 :脐带
规格 :5×10⁵Cells/T25培养瓶
一、基本信息细胞名称 | 人脐带间充质干细胞 | 组织来源 | 脐带 |
商品货号 | YS-01X8081 | 种属来源 | 人 |
包被条件 | 换液频率 | 每2-3天换液一次 | |
生长特性 | 贴壁 | 细胞形态 | 成纤维细胞样 |
传代特性 | 可传5代左右;3代以内状态最佳 | 消化液 | 0.25%胰蛋白酶 |
培养基 | 含 FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin 等 | 培养条件 | 气相:空气,95%;CO2,5% |
细胞简介 |
脐带是哺乳类的连接胎儿和胎盘的管状结构。原来是由羊膜包卷着卵黄囊和尿膜的柄状伸长部而形成的。脐带中通过尿膜的血管即脐动脉和脐静脉,卵黄囊的血管即脐肠系膜动脉及脐肠系膜静脉。当卵黄囊及其血管退化,脐动脉和脐静脉就发达起来,在这些间隙中可以看到疏松的胶状的间充质。在子宫中,子宫动脉在胎盘的母体部分出的毛细血管,与胎盘的子体部胎儿毛细血管靠近,在此处母体和胎儿的血液间进行 CO2 和 O2,代谢产物即代谢废物和营养物质的交换。脐动脉将胎儿来的废物运送至胎盘,脐静脉将 O2 和营养物质从胎盘运送给胎儿。后由子宫静 脉将来自胎儿的代谢废物运走,某种激素和抗体等也通过脐带从母体移交给胎儿。脐带 中含有大量的干细胞,干细胞是生命的种子,它会分化成机体的各种细胞,结出各种不 同的果实——血液细胞、神经细胞、骨骼细胞等。干细胞是具有自我更新、高度增殖和 多项分化潜能的细胞群体;这些细胞可以通过分裂维持自身细胞的特性和数量,又可进 一步分化为各种组织细胞,从而在组织修复等方面发挥积极作用。间充质干细胞(MSC) 是一种具有高度自我更新和多向分化潜能的干细胞。在不同的诱导条件下,可分化为多种造血细胞以外的组织细胞,并具有造血支持、免疫调节、组织修复等作用;目前,多用于风湿免疫疾病的治疗。间充质干细胞(MSCs)是一种具有自我更新和多向分化潜能的成体干细胞,存在于骨髓、脂肪组织、脐血及多种胎儿组织。它可分泌多种细胞因子及生长因子,促进造血干细胞(HSC)的增殖与分化。 MSCs 还具有免疫调节、抗炎和组织修复作用,可减轻移植物抗宿主病(GVHD)及其他移植相关并发症。 |
质量检测:实验室分离的人脐带间充质干细胞经CD31免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
人脐带间充质干细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,人脐带间充质干细胞以此保证该细胞的最佳培养状态。
二、细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片
三、使用方法
人脐带间充质干细胞是一种贴壁细胞,细胞形态呈成纤维细胞样 ,在技术部标准操作流程下,细胞可传2-3代;建议您收到细胞后尽快进行相关实验。客户收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,
37℃温浴1-3min;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入5ml完全培养基终止消化;
3)用吸管轻轻吹打混匀,按传代比例接种T25培养瓶传代,然后补充新鲜的完全培养基至5mL,置于37℃、5%CO2、饱和湿度
的细胞培养箱中静置培养;
4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
3. 细胞收货脱落
1)收集所有细胞悬液,1000rpm,离心5min,保留沉淀;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中,重悬沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min);消化完向离心管内
加入5ml完全培养基终止消化;
3)经1000rpm,离心5min,丢弃上清,用5ml完全培养基(补加1%FBS,促进贴壁)重悬沉淀,接种于新的培养瓶内;
4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。
4. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性,贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿(如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等)时,需要对实验
器皿进行包被,以增强细胞贴壁性,避免细胞因没贴好影响实验;包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚赖氨酸PLL
(0.1mg/ml),明胶(0.1%),依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
原代细胞培养方法及注意事项:
1.准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2.布局:点燃酒精灯,安装吸管帽。
3.处理组织:把组织块置于烧杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。
4.剪切:用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块,以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角烧瓶中,结扎瓶口或塞以胶塞。
5.消化:或用恒温水浴,或置于37℃温箱消化均可,消化中每隔20分钟应摇动一次,如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。
6.分离:在消化过程中见消化液发混浊时,可用吸管吸出少许消化液在镜下观察,如组织已分散成细胞团或单个细胞,立即终止消化,随即通过适宜不锈钢筛,滤掉尚未充分消化开的组织块。低速(500~1000转/分)离心消化液5分钟,吸出上清,加入适量含有血清的培养液。
7.计数:用计数板计数,如细胞悬液细胞密度过大,再补加培养液调整后,分装入培养瓶中。对大多数细胞来说,pH要求在7.2~7.4范围,培养液呈微红色,如颜色偏黄,说明液体变酸,可用NaHCO3调整。
8.培养:置于36.5℃温箱培养,如用CO2温箱培养,瓶盖需拧松半圈。
公司正在出售的产品:
615小鼠乳腺癌瘤株;Ca761 | 水通道蛋白8封闭多肽 |
615小鼠T细胞性白血病瘤株;L7912 | CD39样蛋白2/ENTPD6封闭多肽 |
615小鼠乳头状肺腺癌瘤株;P615 | 半胱氨酸脱硫酶NFS1封闭多肽 |
小鼠肝癌瘤株;H22 | G蛋白偶联受体137封闭多肽 |
615小鼠前胃癌瘤株;Fc | 2号染色体开放阅封闭多肽 |
KM小鼠子宫颈癌瘤株;U14 | 红细胞膜蛋白55封闭多肽 |
KM小鼠子宫颈癌瘤株;U27 | 内皮细胞的分化蛋白6封闭多肽 |
C57小鼠黑色素瘤瘤株;ME(Me) | 清道夫受体STAB2封闭多肽 |
Walker氏癌肉瘤256瘤株;W256 | WDR68蛋白封闭多肽 |
KM小鼠脑神经胶质母细胞瘤瘤株;G422 | 胚胎干细胞相关蛋白FOPNL封闭多肽 |
KM小鼠网织细胞肉瘤瘤株;LⅡ | 低密度脂蛋白受体相关蛋白11封闭多肽 |
T739小鼠肺腺癌瘤株;LA795 | 细胞色素p450 2s1封闭多肽 |
615小鼠网织细胞性白血病瘤株;L615 | 人脐带间充质干细胞脑蛋白4封闭多肽 |
兔间变表皮鳞癌瘤株;VX2 | 膜糖蛋白CD200封闭多肽 |
C57小鼠黑色素瘤瘤株;ME(Me) | 重组人细胞死亡激活剂CIDEB蛋白 |
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