蛋白表达

提供商 ：柏迈德生物

服务名称 ：蛋白表达

重组蛋白表达是生命科学中应用最广泛的技术之一。大规模生产、纯化所需重组蛋白为工业化生产、疾病诊断和药物研发提供了广泛的可能性。

简单的说，重组蛋白表达就是把一个目标蛋白的基因编码在表达载体中的启动子下游，然后导入宿主细胞，最后合成所需的蛋白质。然而，在实践中，蛋白质的表达可能是非常具有挑战性的任务，因为存在大量可能会影响上述过程的因素。例如，每一个蛋白质都以自己独特的方式折叠，会影响到表达宿主的选择。同样，一些蛋白质翻译后需要修饰或适当插入到生物膜，且一些异源蛋白的活性可能会对宿主细胞造成危害。因此，对于重组蛋白的成功表达绝对没有单一的解决方案。 

I真核蛋白表达

酵母表达系统是近十年发展起来的真核表达体系，是目前最为成功的外源蛋白表达系统之一，与其它表达系统相比，酵母表达系统在表达产物的加工、外分秘、翻译后修饰以及糖基化修饰等方面有明显的优势，现已广泛用于外源蛋白的表达，其优势表现在：1表达水平高，既可在胞内表达，又可分泌型表达；2发酵工艺成熟，易放大；3外源蛋白基因遗传稳定。一般外源蛋白基因整合到毕赤酵母染色体上，随染色体复制而复制，不易丢失；4作为真核表达系统，毕赤酵母具有真核生物的亚细胞结构，具有糖基化、脂肪酰化、蛋白磷酸化等翻译后修饰加工功能。因此，酵母表达系统为蛋白的生理活性研究提供了强有力的工具。

服务内容

1 依据客户要求，设计克隆方案，将客户要表达蛋白的编码基因克隆到酵母表达载体，客户可以选择分泌表达（如pPICZaA 、pGAPZaA、pPIC9K等）或胞内表达（如pPICZA 、pPIC3.5K、pESC-系列等）。

2 将构建好的质粒转化到酵母宿主菌，菌种为毕赤酵母。

3 PCR鉴定转化子，选择阳性转化子进行蛋白的诱导表达。

4 可以依据客户的要求，增加多拷贝转化子的筛选以及蛋白表达优化两项服务。

5 根据客户要求纯化重组蛋白。可提供6xHis、GST、MBP等携带标签的融合蛋白的纯化；也可以使用诸如肠激酶、凝血酶等蛋白酶切除标签蛋白，再进一步分离纯化目标蛋白；对分泌到胞外的蛋白采用脱盐透析等方法进行浓缩纯化。
 

II原核蛋白表达

原核表达即将目的基因片段连接至合适的原核表达载体后，转化进入原核菌体，随后利用受体菌自身的蛋白表达系统进行目标蛋白质的重组表达。原核表达系统是远今为止最为成熟可靠的蛋白表达系统，其优点是实验周期短、成本低、产量高。

大肠杆菌E.coli 是重要的原核表达体系。在重组基因转化入E.coli 菌株以后，通过温度和诱导剂的控制，诱导其在宿主菌内表达目的蛋白质，将表达样品进行SDS-PAGE 以检测表达蛋白质。

我实验中心具有成熟的原核和酵母表达体系及研究平台，拥有5L、20L、150L发酵灌及大型冻干机，可以为客户提供原核、真核蛋白表达服务，有无模板均可，并提供蛋白纯化、冻干服务。同时提供表达载体构建及蛋白开发项目服务。如有意愿咨询。