Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer

库存 ：34

保质期 ：室温

供应商 ：上海西格

保存条件 ：-20°C

规格 ：100ml

 

 

对目的蛋白进行检测分析时，总蛋白的提取至关重要，如蛋白提取不好会导致后续试验的不理想甚至失败，如：信号极弱或无杂交信号、背景高、非特异性条带多等.根据目标蛋白的类型和实验应用种类来选择合适的RIPA裂解液，才能程度地保证后续实验的成功。 Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer对细胞有一定的裂解能力，能获得较多的胞浆蛋白，而对细胞核的裂解能力有限，不能完全裂解细胞核，因此获得的总蛋白适用于IP或CO-IP实验；而WB Super RIPA Lysis Buffer对动物组织和细胞的裂解能力极强，它可以完全裂解细胞核和线粒体，并可提取到更多的膜蛋白，从而可获得更多的总蛋白。因其超强的裂解能力，使得大量的基因组DNA从细胞核中释放出来，使蛋白变的十分粘稠，使用Benzonase核酸酶消化可有效解决。RIPA裂解液获得得蛋白可用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度；使用Bradford法测定由本裂解液裂解所得到样品的蛋白浓度会稍有误差。
1.可很好的释放胞浆蛋白，部分释放膜蛋白和核蛋白。 2.经Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer，核蛋白与DNA还紧密 结合在一起，离心后会造成核蛋白的丢失。 3.对于膜蛋白，Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer的破坏力 小，不能使膜蛋白与膜充分分离，故离心后造成膜蛋白 的丢失。 4.在提取蛋白过程中，基因组DNA释放使得蛋白提取液 变的十分粘稠，影响蛋白电泳和杂交效果。		1.可以很好的裂解细胞膜及细胞核，从而更好的完全释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白。 2.对于核蛋白，经WB Super RIPA Lysis Buffer裂解后，核蛋白与粘稠的基因组DNA分离，离心后核蛋白存在于上清中，核蛋白的捕获率高达90%。 3.对于膜蛋白，WB Super RIPA Lysis Buffer可程度的破坏细胞膜和变性蛋白，使蛋白与膜分离，防止蛋白与膜复合物在离心后沉淀，从而防止蛋白丢失。 4.在提取蛋白过程中，基因组DNA释放使得蛋白提取液变的十分粘稠，使用Benzonase核酸酶消化可有效解决。
储存
置于室温阴凉处，可保存2年。
实例
Fig.用WB Super RIPA Lysis Buffer和Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer分别提取核蛋白PPARγ和膜蛋白PLD-1，上样量分别为40ug和10ug总蛋白，ECL发光液显色。A/C泳道为WB Super RIPA Lysis Buffer，B/D泳道为Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer。由此图比较分析表明WB Super RIPA Lysis Buffer能更充分的释放核蛋白和膜蛋白，从而获得更强的信号。

货号	产品名称	规格
XG-P3042	Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer	100ml

PCR反应条件优化：
1、变性温度和时间：
Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer保证模板DNA解链完全是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s，再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长，可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。
2、复性温度和时间:
PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高，产物特异性越高。复性温度越低，产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。
3、延伸温度和时间:
一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时，过高的延伸温度不利于引物与模板的结合，可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间，可根据待扩增片段的长度而定，小于1kb, 1min足够；大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意，延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。
4、循环数:
其他参数选定后，PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后，PCR产物的积累即可达到最大值，实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%，因此不管模板浓度是多少，20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多，非特异扩增增加。
 

PCR的特点：
特异性强：使用两对引物进行扩增提高了特异性，第一轮PCR中由外引物错配产生非特异性产物，同时在第二轮PCR中内引物与错误片段配对扩增的概率极低，降低了扩增多个靶位点的可能性。
灵敏度高：进行两轮PCR扩增，可以执行更多的循环，从低拷贝样本中扩增得到足量的产物，克服了单次扩增平台期限制，提高PCR的灵敏度。

 
降落PCR与温度梯度PCR的区别：
降落PCR与温度梯度PCR都是对反应体系中的退火温度进行优化，但两者在原理上有所不同。
温度梯度PCR是为了找到最适的退火温度，设置不同的退火温度进行多管PCR，将其分别放置在PCR仪中的不同温度模块进行反应，最终找到最适的退火温度，并进一步以此退火温度进行普通PCR扩增。
降落PCR是为了提高反应的特异性，通过设计一系列不断降低的退火温度，在同一PCR管内进行PCR扩增，最终获得大量的特异性扩增产物。
与温度梯度PCR相比，降落PCR更有优势。温度梯度PCR需要多次反应或多管反应找到最适的退火温度，之后还需以找到的最适退火温度再次进行PCR，才能得到较好的扩增效果，操作比较繁琐。降落PCR只需一次反应就可以获得很好的扩增效果，避免了对每对引物进行最适退火温度的优化和测定工作。
降落PCR适用于不确定引物的最适Tm值，或引物扩增效果不佳时，不了解目的模板同源性程度，使用降落PCR可以快速、特异的得到目的扩增片段。根据不同实验的需要，降落PCR还可与其它PCR方法同时使用，如实时定量降落PCR、竞争降落PCR等。
公司正在出售的产品：

人类嗜T淋巴细胞病毒2型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒	糖磷脂酰肌醇ELISA试剂盒 GPI免费代测试剂
柯拉松血吸虫探针法荧光定量PCR试剂盒	Dystonin蛋白ELISA试剂盒 DST免费代测试剂
瓜纳瑞托病毒PCR检测试剂盒	抗巨细胞病毒ELISA试剂盒
贝尔格莱德病毒型PCR检测试剂盒	Engrailed同源框蛋白2ELISA试剂盒
传染性软疣病毒染料法荧光定量PCR试剂盒	G抗原1ELISA试剂盒
鸭源鸡杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒	IgG-Fc片段受体ⅡELISA试剂盒
异源曼氏杆菌PCR检测试剂盒	Leupaxin蛋白ELISA试剂盒
传染性脓疱皮炎病毒PCR检测试剂盒	Midline1蛋白ELISA试剂盒
传染性造血器官坏死病毒(IHNV)核酸检测试剂盒	Neudesin神经营养因子ELISA试剂盒
乙型脑炎病毒PCR检测试剂盒	N-乙酰神经氨酰酸合酶ELISA试剂盒
肠道病毒68型PCR检测试剂盒（荧光PCR法）	人异质性胞核核糖核蛋白D(hnRNP D)检测试剂盒elisa
恙虫病东方体PCR试剂盒	人表面活性蛋白A(SP-A)试剂盒ELISA
溶血隐秘杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒	Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer人锌转运蛋白6(ZnT6)ELISA试剂盒
猪痢疾短螺旋体PCR检测试剂盒	大鼠抗内皮细胞抗体(AECA)试剂盒 ELISA
亨德拉病毒PCR检测试剂盒	大鼠幽门螺旋菌IgG(Hp-IgG)试剂盒 ELISA