pBM21快速克隆试剂盒（克隆载体 含自杀基因）

库存 ：32

保质期 ：12 个月

供应商 ：上海西格

保存条件 ：-20℃

规格 ：20 次

公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断！

货号	产品名称	规格
XG-P2925	pBM21快速克隆试剂盒（克隆载体 含自杀基因）	20次

保存条件：-20℃保存
产品介绍：
pBM21快速克隆试剂盒为一种阳性选择克隆系统，克隆区域位于pBM21质粒的自杀基因（lethal gene）内部。当连接产物转化大肠杆菌后，有外源片段的插入的重组质粒导致载体上的自杀基因功能丧失，细菌存活，无片段连接（载体自连）时，自杀基因表达的毒蛋白使细菌不能存活。该试剂盒利用T4 DNA 连接酶（T4 DNA ligase）的连接活性将平末端DNA片段克隆到具有磷酸化末端的线性化载体pBM21中。
适用于克隆由Pfu、KOD、Xerox、Phusion和Q5等高保真DNA聚合酶扩增的平末端PCR产物或各种方法产生的平末端双链DNA片段。由Taq、Tth和klenTaq等DNA聚合酶扩增的非平末端PCR产物，可通过平末端化酶（Blunting Enzyme）处理成为平末端DNA用于连接。阳性克隆可以用试剂盒提供的引物PBM21F和PBM21R进行菌落PCR或测序鉴定。
产品特点：
（1）连接反应仅需5-30分钟。
（2）适用于平末端PCR产物和平末端双链DNA片段
（3）适用于磷酸化或非磷酸化的DNA片段
（4）pBM21为氨苄抗性，具高拷贝复制起始子

PCR反应基本步骤：
一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成，每个循环包括以下3个步骤：
变性(Denaturation)：
利用高温（93-98℃）使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前，通常加热长一些时间以确保模板和引物完全分离，仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟，接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。
退火或称接合,复性(Annealling)：
在DNA双链分离后，降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。
延伸(Extension)：
DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr（来自于嗜热菌Thermus brockianus）约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。

PCR 反应需要使用哪些试剂？
一、模板DNA：PCR反应需要模板DNA，如从细胞、组织、血液中提取DNA等；
二、引物：PCR反应的两个引物，分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域，引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物；
三、dNTPs：PCR反应中需要四种dNTPs，包括脱氧腺苷酸（dATP）、脱氧胸苷酸（dCTP）、脱氧鸟苷酸（dGTP）、脱氧胞嘧啶酸（dTTP），用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程，用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增；四、Taq DNA聚合酶：PCR反应需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等，用于扩增DNA链；
五、PCR buffer溶液：对PCR反应具有缓冲作用，调节反应pH，硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛，可增强PCR反应特异性，从而提高反应效率；
六、酶切体系：PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤，常常需要进行酶切操作。
七、MARK:一种分子量标准，用来判别DNA片段大小的工具。
八、DNA纯化试剂盒：用于纯化PCR反应产物；

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