M-MLV 4 One-Step RT-PCR Kit逆转录一步法通用试剂盒

库存 ：55

保质期 ：12 个月

供应商 ：上海西格

保存条件 ：-20℃

规格 ：50ul体系×50 次 2184

公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断！

货号	产品名称	规格
XG-P2844	M-MLV 4 One-Step RT-PCR Kit逆转录一步法通用试剂盒	50ul体系×50 次

储存条件：-20℃保存两年。
产品简介：
M-MLV 4 One-Step RT-PCR Kit专为以RNA为模板的终点法PCR检测而设计。使用基因特异引物 (GSP)，逆转录和PCR反应在一管内完成，不需要额外的开管/移液操作，大大提高了检测通量，并降低了污染的风险。经过优化的缓冲体系，M-MLV 4 One-Step RT-PCR Kit的检测灵敏度可达到1 ng总RNA，并可扩增长达12kb的片段。试剂盒以便捷的Master Mix形式提供。
2 × One Step Mix包含优化的缓冲体系和dNTP；Enzyme Mix包含比例优化的M-MLV 4 、RNase inhibitor以及Hot start DNA Polymerase。


 适用范围：
高拷贝、低拷贝基因检测。
高GC含量或具有复杂二级结构的RNA模板。
PCR反应基本步骤：
一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成，每个循环包括以下3个步骤：
变性(Denaturation)：
利用高温（93-98℃）使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前，通常加热长一些时间以确保模板和引物完全分离，仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟，接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。
退火或称接合,复性(Annealling)：
在DNA双链分离后，降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。
延伸(Extension)：
DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr（来自于嗜热菌Thermus brockianus）约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。

PCR 反应需要使用哪些试剂？
一、模板DNA：PCR反应需要模板DNA，如从细胞、组织、血液中提取DNA等；
二、引物：PCR反应的两个引物，分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域，引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物；
三、dNTPs：PCR反应中需要四种dNTPs，包括脱氧腺苷酸（dATP）、脱氧胸苷酸（dCTP）、脱氧鸟苷酸（dGTP）、脱氧胞嘧啶酸（dTTP），用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程，用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增；四、Taq DNA聚合酶：PCR反应需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等，用于扩增DNA链；
五、PCR buffer溶液：对PCR反应具有缓冲作用，调节反应pH，硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛，可增强PCR反应特异性，从而提高反应效率；
六、酶切体系：PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤，常常需要进行酶切操作。
七、MARK:一种分子量标准，用来判别DNA片段大小的工具。
八、DNA纯化试剂盒：用于纯化PCR反应产物；

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