Fast Taq DNA Polymerase(快速扩增聚合酶)

Fast Taq DNA Polymerase(快速扩增聚合酶)

价格: ¥265.20

品牌:西格

货号:XG-P2797

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库存 :37

保质期 :12 个月

供应商 :上海西格

保存条件 :-20℃

规格 :500U

公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断!
货号 产品名称 规格
XG-P2797 Fast Taq DNA Polymerase(快速扩增聚合酶) 500U
储存条件:-20℃保存


 制品说明:
         Fast Taq DNA Polymerase 是经过基因改造的可以快速扩增的DNA聚和酶。Fast Taq DNA Polymerase具有5′→3′DNA聚合酶活性和5′→′外切核酸酶活性,无3′→5′外切酶活性。在PCR反应中,Fast Taq DNA Polymerase延伸速度为2 kb/20sec,产物3′端带A,可直接用于TA克隆。
活性单位:1单位(U)Fast Taq DNA Polymerase 活性定义为在74℃、30分钟内,以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板引物,将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。
质量控制:SDS-PAGE 检测纯度大于99%,经检测无外源核酸酶活性;PCR方法检测无宿主残余DNA,能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因;室温存放一周,无明显活性改变。
酶贮存缓冲液:
    20mM Tris-HCl (pH8.0), 0.1 mM EDTA, 1mM DTT, 100 mM KCl, Stabilizers, 50% glycerol。
        5×Fast Taq Buffer:
       100 mM Tris-HCl (pH 8.4),100 mM KCl, 50 mM(NH4)2 SO4,7.5 mM MgCl2以及其他成分。
适用范围: 一般用于DNA片断的PCR扩增、DNA标记、引物延伸、序列测定、平末端加A 等,产物可以直接用于TA载体克隆。
PCR反应基本步骤:
一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:
变性(Denaturation):
利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物完全分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。
退火或称接合,复性(Annealling)
在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。
延伸(Extension):
DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。


PCR 反应需要使用哪些试剂?
一、模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;
二、引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;
三、dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;四、Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;
五、PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;
六、酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。
七、MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。
八、DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物;

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