Endotoxin Removing Magnetic Beads（内毒素清除磁珠）

库存 ：53

保质期 ：12 个月

供应商 ：上海西格

保存条件 ：2-8°C

规格 ：1ml（50mg/ml）

产品介绍： 内毒素清除磁珠是为快速、高效的一步清除被污染样品中的内毒素（由革兰氏阴性 细菌产生的热原）专门设计的，是表面附着有多粘菌素 B 的超顺磁珠。

 

 产品特点：
1.快速简单的一步高通量操作，仅仅向样品中添加磁珠，混匀后通过磁力吸附去除绑定
有内毒素的磁珠。无需吸附柱及滤器，同时也不需重复的移液和离心过程。(Fig.1)
2.蛋白或 DNA 的回收率可达到 95%
3.宽松的 pH 工作范围(pH5 -9)
4.极高的结合能力: 4500-6000E.U./ml
5.磁珠可被回收利用至少 5 次。
实验程序：

提示：将所有试剂和样品平衡至室温，因为温度、pH 值、离子强度会影响磁珠的性能。
所需材料
·Regeneration Buffer: 1% 脱氧胆酸钠
A.操作程序
提示：
·将所有和样品平衡至室温，因为温度、pH 值、离子强度会影响磁珠的性能。
·尽管磁珠在 pH 值 5-9 时均可与 LPS 结合，但为了减少非特异性结合，请将所有缓冲液 pH 值调节至 7-8, NaCl 盐浓度为 0.1-0.5 M（最终浓度）。
·仅使用无内毒素溶液，以防止将任何内毒素引入样品中。
1. 震荡试剂瓶，使磁珠重新悬浮。
2. 吸取所需体积的磁珠转移到新的离心管中。将试管放在磁力分离器上 1-3 分钟。当磁珠完全沉淀时，去除上清液。
3. 从磁力分离器上取下试管，用 5 倍体积的无内毒素 ddH2O 彻底清洗磁珠三次，如步骤 2 所述。
4. 用 10 倍体积的 Regeneration Buffer 重新悬浮磁珠，并在室温下连续旋转孵育 15分钟。
5. 按照步骤 2 所述清洗步骤，用 5 倍体积的无热原适合缓冲液或无内毒素 ddH2O 清洗磁珠三次。
6. 向磁珠中加入适量的蛋白质或 DNA 溶液，并在室温下连续旋转孵育 15 分钟。
7. 将试管放在磁力分离器上 1-3 分钟，直到上清液变澄清。试管保持在磁力分离器上，将上清液移到无内毒素试管中。
B.磁珠再生
1. 按照 A2 所述清洗步骤，用 5 倍体积的 Regeneration Buffer 清洗磁珠三次，以去除任何结合在磁珠上的内毒素。
2. 再按照 A2 所述步骤，用 5 倍体积的无内毒素 ddH2O 清洗磁珠三次。
3.将磁珠储存在 20-25%乙醇中，在 2-8°C 环境保存。
提示：
·磁珠至少可再生使用 5 次，且不会失去活性
·每次使用前，包括首次使用前，必须对磁珠进行再生清洗

货号	产品名称	规格
XG-P2773	Endotoxin Removing Magnetic Beads（内毒素清除磁珠）	1ml（50mg/ml）

PCR反应条件优化：
1、变性温度和时间：
Endotoxin Removing Magnetic Beads（内毒素清除磁珠）保证模板DNA解链完全是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s，再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长，可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。
2、复性温度和时间:
PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高，产物特异性越高。复性温度越低，产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。
3、延伸温度和时间:
一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时，过高的延伸温度不利于引物与模板的结合，可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间，可根据待扩增片段的长度而定，小于1kb, 1min足够；大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意，延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。
4、循环数:
其他参数选定后，PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后，PCR产物的积累即可达到最大值，实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%，因此不管模板浓度是多少，20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多，非特异扩增增加。
 

PCR的特点：
特异性强：使用两对引物进行扩增提高了特异性，第一轮PCR中由外引物错配产生非特异性产物，同时在第二轮PCR中内引物与错误片段配对扩增的概率极低，降低了扩增多个靶位点的可能性。
灵敏度高：进行两轮PCR扩增，可以执行更多的循环，从低拷贝样本中扩增得到足量的产物，克服了单次扩增平台期限制，提高PCR的灵敏度。

 
降落PCR与温度梯度PCR的区别：
降落PCR与温度梯度PCR都是对反应体系中的退火温度进行优化，但两者在原理上有所不同。
温度梯度PCR是为了找到最适的退火温度，设置不同的退火温度进行多管PCR，将其分别放置在PCR仪中的不同温度模块进行反应，最终找到最适的退火温度，并进一步以此退火温度进行普通PCR扩增。
降落PCR是为了提高反应的特异性，通过设计一系列不断降低的退火温度，在同一PCR管内进行PCR扩增，最终获得大量的特异性扩增产物。
与温度梯度PCR相比，降落PCR更有优势。温度梯度PCR需要多次反应或多管反应找到最适的退火温度，之后还需以找到的最适退火温度再次进行PCR，才能得到较好的扩增效果，操作比较繁琐。降落PCR只需一次反应就可以获得很好的扩增效果，避免了对每对引物进行最适退火温度的优化和测定工作。
降落PCR适用于不确定引物的最适Tm值，或引物扩增效果不佳时，不了解目的模板同源性程度，使用降落PCR可以快速、特异的得到目的扩增片段。根据不同实验的需要，降落PCR还可与其它PCR方法同时使用，如实时定量降落PCR、竞争降落PCR等。
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