链霉亲和素磁珠

库存 ：50

保质期 ：12 个月

供应商 ：上海西格

保存条件 ：2-8°C

规格 ：1ml（10mg/ml）

公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断！

货号	产品名称	规格
XG-P2770	链霉亲和素磁珠	1ml（10mg/ml）

链霉亲和素磁珠是一种高度均匀的超顺磁性微球，表面包覆着高密度的超纯链霉亲和素（＞97%）。微球经过专门设计、测试和质量控制，可用于免疫沉淀、细胞分选、快速单步捕获生物素化分子，如 DNA、RNA、抗体或细胞裂解物或杂交反应中的蛋白质等。链霉亲和素（或抗生素多倍体）和生物素之间的相互作用表现出已知的最高非共价相互作用之一。抗生物素、链霉亲和素、单体抗生物素及其类似物已成为探针和亲和配体的有力工具，在生化分析、诊断、亲和纯化和药物传递等领域有着广泛的应用。链霉亲和素是一种四聚体生物素结合蛋白，源于链霉菌亲和素 II，质量为 60000 道尔顿。链霉亲和素不含碳水化合物，pI 较低，非特异性结合程度较低，使链霉亲和素成为许多检测系统的理想试剂选择。
产品特点: 使用链霉亲和素-生物素结合系统的优点和益处：
·极高的亲和力：链霉亲和素是同源四聚体，具有较高的生物素结合亲和力，具有KD~10−14 米。
·高稳定性：生物素结合复合物具有优异的稳定性，可抵抗极端 pH、温度（2°C 和40°C）、苛刻的有机溶剂、变性剂（如氯化胍）、洗涤剂（如 SDS）和蛋白水解酶。
·突出的选择性和特异性：生物素和链霉亲和素的相互作用具有高度的特异性，确保了较低的非特异性结合。
·高灵敏度：高稳定性和特异性确保了高检测灵敏度。
·非常灵活：生物素的小尺寸和显著稳定性被证明非常适合相对容易地并入各种分子，例如合成聚合物、荧光团、小分子或生物分子中的特定位置，从而对共轭生物分子的结构和功能施加最小的扰动。
链霉亲和素磁性微球的优点：

·快速、简单且一步到位的高通量程序：消除了柱状物或过滤器，或重复费力的移液或 离心（图 1） ·高结合能力 ·表现出较低的非特异性结合 ·可扩展-可轻松调整样本大小和自动化

产品属性：

所需材料 ·
Binding Buffer: 1x PBS, 0.1% BSA, pH 7.4 ·磁力分离器（适用于手动操作）： 根据实验时生物样品的体积，使用者可以选择以下不同型号的磁力分离器： 8孔磁力架 可以容纳8个单独的1.5-2.0 ml 离心管 ; 24孔磁力架可以容纳24个单独的1.5-2.0 ml离心管; 4孔磁力-15可以容纳 4个单独的15ml离心管; 4孔磁力架-50可以容纳四个单独的50 ml离心 管。

操作过程：
注: · 该方案是一种通用亲和纯化程序。为了获得最佳结果，每个用户应确定纯化单个目标蛋白的最佳工作条件。
·根据粗样品中目标生物素化分子的数量（基于珠子结合能力），优化每种应用中使用的珠子数量。使用过多的磁珠会导致背景较高，而使用过少的磁珠会导致产量较低。
1. 将最佳量的珠子转移到离心管中。将管放在磁力架上1-3分钟。在管留在分离器上的同时去除上清液。
2. 取下试管，用5倍体积的 1x Binding/Washing Buffer通过涡流清洗珠子30秒。将试管置于室温下1-3分钟。将管放在磁力架上1-3分钟。在管留在分离器上的同时去除上清液。
3. 重复步骤二两次。
向含有目标分子的粗样品中加入洗涤过的珠子，并在室温或所需温度下培养1-2小时（温度越低，培养时间越长）。
注: 强烈建议进行滴定以优化培养时间。更长时间的孵育可能导致更高的背景。
4. 如步骤 2 所述清洗磁珠，直到 280 nm 处洗脱液的吸光度接近背景水平（OD280<0.05）。
注: 添加更高浓度的盐、非离子洗涤剂和还原剂可降低非特异性背景。例如，向洗涤缓冲液中添加NaCl（高达1-1.5 M）、0.1-0.5%的非离子洗涤剂，如Triton X 100或吐温20。

PCR反应基本步骤：
一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成，每个循环包括以下3个步骤：
变性(Denaturation)：
利用高温（93-98℃）使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前，通常加热长一些时间以确保模板和引物完全分离，仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟，接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。
退火或称接合,复性(Annealling)：
在DNA双链分离后，降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。
延伸(Extension)：
DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr（来自于嗜热菌Thermus brockianus）约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。

PCR 反应需要使用哪些试剂？
一、模板DNA：PCR反应需要模板DNA，如从细胞、组织、血液中提取DNA等；
二、引物：PCR反应的两个引物，分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域，引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物；
三、dNTPs：PCR反应中需要四种dNTPs，包括脱氧腺苷酸（dATP）、脱氧胸苷酸（dCTP）、脱氧鸟苷酸（dGTP）、脱氧胞嘧啶酸（dTTP），用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程，用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增；四、Taq DNA聚合酶：PCR反应需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等，用于扩增DNA链；
五、PCR buffer溶液：对PCR反应具有缓冲作用，调节反应pH，硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛，可增强PCR反应特异性，从而提高反应效率；
六、酶切体系：PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤，常常需要进行酶切操作。
七、MARK:一种分子量标准，用来判别DNA片段大小的工具。
八、DNA纯化试剂盒：用于纯化PCR反应产物；

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