T7 RNA Polymerase （T7 RNA聚合酶）

产品概述
T7 RNA Polymerase，即T7 RNA聚合酶，是一种对T7噬菌体启动子具有高度特异性的DNA依赖性RNA聚合酶。该酶以含有T7启动子序列的单链或双链DNA为模板，以NTP为底物，合成与T7启动子下游的DNA一条链互补的RNA。

产品组分

产品名称	规格
T7 RNA Polymerase (50 U/μL)	100 μL
Transcription Buffer (10 ×)	1 mL

产品基本信息

产品名称	T7 RNA Polymerase
来源	E.coli
活性	50 U/μL
储存缓冲液	50 mM Tris-HCl (25℃, pH 7.9), 100 mM NaCl, 1 mM EDTA; 2mM DTT, 0.1% Triton X-100, 50% (v/v) Glycerol
储存条件	-20℃
反应缓冲液（1X）	40 mM Tris-HCl, 27 mM MgCl2, 10 mM DTT, 2 mM spermidine
酶活定义	在37℃ pH8.0的条件下，1小时内使1 nmol的[3H]ATP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位

产品应用
用于单链RNA合成，包括mRNA，siRNA，gRNA等各类RNA前体。以及合成RNA探针，还可以利用帽类似物合成加帽RNA。

实验流程
1、将各组分解冻分别混匀后，短暂离心使液体收集于管底，置于冰上。

2、体外转录体系

组分	用量	终浓度
Transcription Buffer (10 ×)	2 μL	1 ×
T7 RNA Polymerase (50 U/μL)	2 μL	5 U/μL
ATP/CTP/GTP/UTP (100 mM)	Each1.5 μL	Each 7.5 mM
Template DNA	0.1-1 μg	-
RNase Free Water	up to 20 μL	-

3、混匀、离心、37℃反应2-3 h。
4、（选做）向反应体系中加入Dnase I，37℃孵育15 min，消化DNA模板。

注意事项

1. 模板DNA的纯度对体外转录过程影响很大。模板制备过程中的RNase残留会影响体外转录产生的RNA质量。模板DNA应为RNase-Free、高纯度，建议OD260/280为1.8~2.0。
2. 添加体系时，模板最后加入。Transcription Buffer (10 ×)中含有亚精胺，亚精胺浓度过高会引起DNA模板沉淀。
3. 反应体系中可添加RNase Inhibitor，防止RNase污染。建议20 μL体系中添加4 U RNase Inhibitor。
4. 反应体系中可添加Pyrophosphatase, Inorganic，提高RNA产量。建议20 μL体系中添加0.02 U Pyrophosphatase, Inorganic。

订购信息

产品名称	产品货号	规格
T7 RNA Polymerase (50 U/μL)	SCB0B001A	100 μL
T7 RNA Polymerase (50 U/μL)	SCB0B001B	500 μL
Transcription Buffer (10 ×)	SCB0A002A	1 mL
Transcription Buffer (10 ×)	SCB0A002B	5 mL