一步法TUNEL流式凋亡检测试剂盒（红色，Elab Fluor® 647）价格

库存：大量

英文名：One-step TUNEL Flow Cytometry Apoptosis Kit (Red, Elab Fluor® 647)

保质期： 1 年

供应商：北京百奥创新科技有限公司

保存条件：-20°C

规格：20 Assays/50 Assays/100 Assays

一步法TUNEL流式凋亡检测试剂盒（红色，Elab Fluor® 647）

产品简介
Elabscience® One-step TUNEL Flow Cytometry Apoptosis Kit 是一款灵敏度高且能快速简便地检测细胞凋亡的产品。本试剂盒可通过流式细胞仪来进行悬浮细胞、贴壁细胞的流式凋亡检测。
检测原理
细胞在发生凋亡时，会激活一些特异性的 DNA 内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组 DNA。使得凋亡细胞的 DNA 被切割成 180~200bp 片段，在琼脂糖凝胶上通常以 180~200bp 的阶梯状迁移。细胞经过固定破膜后，TdT 酶（脱氧核糖核酸末端转移酶）将荧光标记的 dUTP 连接到细胞断裂 DNA 暴露的 3'-OH 末端，通过流式细胞仪检测 dUTP 偶联物发出的荧光信号，从而来检测晚期凋亡。
产品组分

检测样本类型
悬浮细胞
贴壁细胞
自备试剂及仪器
1) 试剂 PBS（含 1%BSA）缓冲液（pH7.2～7.4）。
注：PBS（含 1%BSA）缓冲液（pH7.2～7.4），目的是减少离心造成的细胞损失。
2) 仪器流式细胞仪、离心机。
实验流程

对照设置
阴性对照：排除细胞本底、药物处理等原因产生的荧光背景以及非特异性染色造成的影响。准备一组细胞作为阴性对照，第 8 步标记工作液配制时不添加 TdT 酶，其余操作与实验组相同。
实验步骤
1. 收集细胞并进行计数，每组取 1×106个细胞，300×g 离心 5 min，弃上清。
注：若样本为贴壁细胞，凋亡细胞会有部分悬浮于上清中，上清中的细胞也要收集。
2. 加入 200 μL PBS（含 1%BSA）重悬细胞，加入 200 μL Fixation Buffer，室温固定 60 min（推荐使用摇转方式，或每 15 min 混匀一次）。
3. 加入 1mL PBS（含 1%BSA），600×g 离心 5 min，弃上清。
4. 加入 200 μL Permeabilization Buffer，冰上破膜 10 min。
注：破膜温度过高或者时间过久会导致细胞破碎，因此建议 Permeabilization Buffer 解冻后放置在 4°C，待使用前取出；另外破膜时间最长不要超过 15 min。
5. 加入 1~2 mL PBS（含 1%BSA）终止破膜，轻轻吹打混匀后，600×g 离心 5 min，弃上清。
6. 加入 200 μL TdT Equilibration Buffer，轻轻吹打混匀， 37°C 平衡 15 min。
7. 600×g 离心 5 min，弃上清，收集细胞沉淀。
8. 按照分组参考下表配制标记工作液，每个样本加入 100 μL 反应液（充分混匀，现配现用）。

注： ① TdT Equilibration Buffer 使用前，室温静置直至完全溶解。冰冻的平衡液融化后可能会出现钴盐结晶，此为正常现象。使用前涡旋混匀。
② Labeling Solution 使用前，请置于冰上溶解，待完全溶解后离心，用枪头吹打混匀。
③ TdT Enzyme 对温度较敏感，请严格保存于-20°C，使用前取出，使用后立即放回。
④ 配制标记工作液时，建议不要涡旋。
9. 37°C 避光孵育 60 min（每 20 min 轻轻摇晃混匀细胞）。
10. 加入 1 mL Stop Solution 轻轻吹打混匀，室温静置 5 min，加入 300~500 μL PBS(含 1%BSA)，600×g 离心 5 min，弃上清。
11. 加入 200 μL PBS（含 1%BSA）重悬细胞，上机检测。
检测
在流式细胞仪中选择合适的通道检测。

注：为避免荧光淬灭，请尽快检测。

注意事项
1. 本产品仅限于专业人员的科学研究使用。
2. 请注意安全事项，遵守实验室试剂操作规范操作。
3. 用于该试剂盒的检测样本最低细胞数目不低于 5×105个。
4. 实验中需要重悬细胞的步骤，用移液器轻轻吹打细胞 10~20 次，吹打时请勿将枪头中的液体完全吹出，避免造成细胞损伤和产生过多的气泡。
5. 离心去上清的操作要小心谨慎，避免造成细胞损失。
6. Labeling Solution 和 TdT Enzyme 应避免反复冻融和涡旋操作