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供应商 :信帆生物
透明质酸放射检测服务【意义】
透明质酸(Hyaluronic Acid, HA)是一种广泛存在于细胞外基质
中的高分子多糖,主要由肝内皮细胞进行降解。肝组织正常结构受到
损伤时,一方面 HA 的合成增加,另一方面肝脏对 HA 的降解能力下
降,导致血清中 HA 水平明显增高,并且增高的程度与肝组织炎症及
纤维化程度呈正相关。
【试验原理】
本方法采用竞争放射免疫分析法,即标准或待测样品中的 HA 和
125I-HA 共同与限量的透明质酸结合蛋白(Hyaluronic Acid Binding
Protein, HABP)在适宜的条件下进行竞争性结合反应。一部分 125I-HA
125
与 HABP 结合形成复合物,而另一部分呈游离状态。 I-HA 与 HABP
结合的比例取决于标准或待测样品中非标记 HA 的含量,非标记 HA
的含量越高,125I-HA 与 HABP 形成的复合物越少。HA-HABP 复合
物与 HABP 抗体和第二抗体形成交联的聚合物沉淀下来,测定沉淀物
的放射性计数。经过适当的数据处理后可获得标准曲线,从标准曲线
上查出被测样品的 HA 含量(数据可由计算机自动处理)。
【放射性核素半衰期】本品所用核素为碘[125I],其物理半衰期(T )
1/2为 60天。
【适用仪器】
适用于各类γ-放射免疫分析仪。
【血样处理】
取静脉血分离血清,48 小时内测量可在 2~8℃密闭保存;超过 48
小时-20℃密闭冷冻保存,至少稳定 2 个月,但要避免反复冻融。
【试剂的配制、使用方法和保存】
1.125I-HA 标记物:1 瓶,红色液体,含 1~3μCi 125I 标记的透明
质酸,2~8℃保存,标识的有效期内稳定;
2.透明质酸结合蛋白(HABP):1 瓶,兰色液体,2~8℃保存,
标识的有效期内稳定;
3.透明质酸标准品:7 瓶,无色液体,浓度依次为:0、25、50、
100、200、400、800ng/ml,2~8℃保存 42 天内稳定,-20℃
冷冻保存,标识的有效期内稳定,应避免反复冻融;
4. 透明质酸结合蛋白抗体:1 瓶,绿色液体,2~8℃保存,标识
的有效期内稳定;
5. HA 第二抗体:1 瓶,液体,2~8℃保存,标识的有效期内稳
定;
6. HA 质控血清:2 瓶,冻干品,使用前每瓶用 0.5ml 蒸馏水溶
解,溶解后至少 15 分钟才能用于加样。冻干品 2~8℃可保存
3 个月,-20℃冷冻保存标识的有效期内稳定;溶解后 2~8℃
可保存 48 小时,-20℃冷冻可保存 2个月,应避免反复冻融。
【测定步骤 】
取聚苯乙烯试管若干,编号后按加样顺序表进行加样,加样前所
有试剂包括待测样品要小心摇匀,尽量避免产生泡沫。为了加样准确
各种试剂和样品在加样之前应先平衡到室温。
【数据处理】
1. 联机处理:由电脑自动处理得出结果。注意放射免疫方法和
免疫放射方法由于原理不同,处理软件也不一样,用户一定要使
用合适的处理软件进行数据处理。本方法推荐用户使用 log—
logit 或四参数法数据处理模式。
【对试验结果的解释】
1. 试验结果质量控制 25~800ng/ml 浓度范围内用 log-logit 数据
处理模式拟合,剂量-反应曲线相关系数不低于 0.9920;ED75、
ED50、ED25 应在标准曲线范围内;质控血清测定值应在允许范
围内。
2. 如果标准曲线相关系数低于 0.9920 或 ED75、ED50、ED25 不
在标准曲线范围内或者质控血清测定值不在允许范围内,则本次
试验视为无效,应重新进行检测。
3. 正常人血清参考值范围:0-100ng/ml,中老年测值略高,进食
后血清测值高于空腹值。
肝病、慢活肝>160ng/ml;肝纤维化>250ng/ml。
由于地区不同,使用的仪器不同,所测正常值存在一定差异,
因此本说明书所提供的正常值仅作参考。
【主要技术指标 】
1. 测定范围:25~800ng/ml;
2. 灵敏度:5.5ng/ml;
3. 精密度:批内变异 CV<10%;批间变异 CV<15%。
【注意事项】收到后尽快存放在 2-8℃保存,使用前应平衡至室
温,加试剂前必须摇匀。
1. 操作前请仔细阅读说明书,不同批号的试剂不得混用。
2. 加样操作应快速准确手法一致,尽量缩短整个加样时间。一
批测定中管数不宜过多,以加入 HABP 前后管相差在 5 分钟
内为宜,严格控制每步反应的时间和温度。
3. 加样头不可混用,以免交叉污染。
4. 加标准品、质控或样品时注意将样本加到试管底部;加标记
物时加样头不要碰到液面;加抗体时加样头应在液面之上约
1cm 以免交叉污染。
5. 温浴之前应充分混合均匀。
6. 离心机停止转动后应马上吸弃上清液,不得损失沉淀,否则
将会影响结果的准确性。
7. 试剂请在有效期内使用。
9. 使用本试剂应注意放射防护,放射性废弃物须按放射防护条
例规定处理。
10. 严重溶血的样品可能造成测定值不准确,请不要使用;
11. 当样品中 HA 浓度高于 800ng/ml 时,可将样品用“0”稀释
后复测,测定浓度乘以稀释倍数即为样品浓度;
12. 第二抗体中可能有少量沉淀,为正常现象,使用前请摇均;
【包装、规格】
100 管/盒,50 管/盒
【贮存】
2~8℃保存,防潮。
【有效期】
1 个月。
透明质酸放射检测服务
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