蓝色荧光细胞周期检测试剂盒Cell Cycle Assay Kit

库存 ：大量

英文名 ：Cell Cycle Assay Kit (Blue Fluorescence)

保质期 ：1 年

供应商 ：北京百奥创新科技有限公司

保存条件 ： -20°C 避光保存

规格 ： 20 Assays/50 Assays/100 Assays

保存条件
RNase A Reagent 适当分装后-20°C 可保存 1 年。Cycle Blue Reagent -20°C 避光可保存 1 年。
检测原理
Elabscience®的 Cell Cycle Assay Kit (Blue Fluorescence)是通过检测 DNA 含量来检测细胞周期的试 剂盒。本试剂盒可应用于培养细胞（悬浮、贴壁）的 DNA 含量（细胞周期）检测。
细胞周期（cell cycle）是指连续分裂细胞从一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂结束所经历的整个 过程。在这个过程中，细胞遗传物质复制并加倍，且在分裂结束时平均分配到两个子细胞中去。细胞周 期可以分为分裂间期（interphase）和有丝分裂期(M phase)，分裂间期又可以细分为休眠期（G0），DNA 合成前期（G1），DNA 合成期（S），DNA 合成后期（G2）。利用细胞内 DNA 能够和某些特定荧光染 料（如 Cycle Blue）结合的特性，细胞各个时期其 DNA 含量不同从而结合的荧光染料的量不同，通过 流式细胞仪检测荧光强度即可反映细胞周期变化情况。
Cycle Blue 染色后，假设 G0/G1 期细胞的荧光强度为 1，那么含有双份基因组 DNA 的 G2/M 期细 胞的荧光强度的理论值为 2，正在进行 DNA 复制的 S 期细胞的荧光强度为 1~2 之间。凋亡细胞由于细 胞核发生浓缩以及 DNA 片段化(DNA fragmentation)导致部分基因组 DNA 片段在染色过程中丢失，因 此凋亡细胞在 Cycle Blue 染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于 1，在流式检测的结果图上出现所谓 的 sub-G1 峰，即凋亡细胞峰。
Detection principle
Elabscience's® Cell Cycle Assay Kit (Blue Fluorescence) is a test kit that measures the cell cycle by measuring DNA content. This kit can be applied to the detection of DNA content (cell cycle) of cultured cells (suspension, adherent).
The cell cycle refers to the process that a cell undergoes from the end of one mitosis to the end of the next mitosis when it divides continuously. In this process, the genetic material of the cell is duplicated and doubled, and at the end of the division it is equally distributed to the two daughter cells. The cell cycle can be divided into interphase and mitosis, which can be subdivided into dormant phase (G0), prophase of DNA synthesis (G1), phase of DNA synthesis (S), and phase of DNA synthesis (G2). Taking advantage of the fact that intracellular DNA can bind to certain fluorescent dyes (such as Cycle Blue), the amount of fluorescent dyes bound to cells varies depending on the amount of DNA content at different stages, and the fluorescence intensity can be detected by flow cytometry to reflect the changes in the cell cycle.
After Cycle Blue staining, assuming that the fluorescence intensity of cells in the G0/G1 phase is 1, then the theoretical value of the fluorescence intensity of G2/M phase cells containing double genomic DNA is 2, and the fluorescence intensity of cells in S phase undergoing DNA replication is between 1~2. Apoptotic cells are lost in the staining process due to the condensation of nuclei and DNA fragmentation, so the apoptotic cells show obvious weak staining after Cycle Blue staining, that is, the fluorescence intensity is less than 1, and the so-called sub-G1 peak, that is, the apoptotic cell peak, appears on the result map of flow cytometry. 实验操作指南
1． 准备工作
A．无水乙醇-20°C 冰箱过夜。
B．RNase A Reagent 溶解后混匀，冰浴备用。
2． 样本处理
1） 按实验方案对细胞进行处理后，收集约 5×105 细胞。
2） 300×g 离心 5 min，弃上清。
3） 加入 1 mL PBS 洗涤，300×g 离心 5 min，弃上清。
4） 加入 0.3 mL 的 PBS 重悬细胞。
3． 加入 0.7 mL 的-20°C 无水乙醇，充分混匀后置于-20°C 冰箱中 1h 或过夜。
4． 300×g 离心 5 min，弃上清，加入 1 mL 的 PBS 重悬细胞，室温放置 15 min。
5． 300×g 离心 5 min，弃上清，加入 100 μL 的 RNase A Reagent 并充分悬浮细胞，37°C 水浴 30 min。
6． 加入 400 μL 的 Cycle Blue Reagent 并充分混匀，2-8°C 避光孵育 30 min。
7． 立即上机检测，Cycle Blue 的最大激发波长是 364nm，最大发射波长是 454nm。
注意事项
1. 保质期 1 年。为获得最佳的使用效果，请在 3-6 个月内使用。
2. 实验结果需用流式细胞仪进行检测。
3. 荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量 注意避光。
4. Cycle Blue Reagent 对人体有刺激，操作时请小心，并注意适当防护以免直接接触人体或吸入体内。
5. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放 于普通住宅内。
6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。