【单细胞】【空间转录组】CosMx™ SMI单细胞空间原位技术检测平台

文献支持【单细胞】【空间转录组】CosMx™ SMI单细胞空间原位技术检测平台

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提供商 :生物芯片

服务名称 :CosMxTM SMI单细胞空间 原位技术检测平台

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       NanoString发布的CosMx™ᅠSMI单细胞空间原位分子成像平台,结合了超高分辨率成像技术和多靶标检测能力,能够在单细胞及亚细胞分辨率下对超多靶标(RNA和蛋白)的空间原位信息进行可视化和定量分析。众所周知,FFPE样本的RNA和蛋白质往往质量较低、降解严重,因此对其进行分析极具挑战性。CosMx™ᅠSMI系统具有简单的样本制备流程和稳定的原位杂交化学原理,能够兼容多种组织类型的检测,包括新鲜冷冻组织(FF)、福尔马林固定石蜡包埋组织(FFPE)以及组织芯片(TMA)等。目前已有panel能够实现对1000种RNA和64种蛋白进行检测,并且将在2024年上半年全球提供6000种RNA检测方案,能在保留靶标基因在组织原位空间信息的基础上,实现更高的基因组覆盖度,支持研究人员透彻解析组织和细胞异质性,深入研究背后的生物学功能,发现重要的生物标志物。

       自CosMx™ SMI商业化发布以来一年左右的时间里,利用CosMx™ SMI平台技术已开展的研究项目>150项;涉及的组织类型>70种;已正式发表见刊的研究成果文章>30篇。


CosMx™ SMI工作原理

       针对目标基因设计“原位杂交探针”(ISH),探针分2段,第一段是针对目标基因的结合区域(Target bindingdomain),第二段为读出域(Readout domain),包括四段不同的序列,分别与特定的报告探针(Reporter)进行杂交。报告探针,一部分与Readout domain互补杂交,另一部分与荧光染料结合,在激发光的照射下发出荧光,报告目标RNA的存在。

       1000基因panel的一次完整的探针杂交过程共包括16轮,每轮杂交都会有4种颜色的荧光染料(报告探针与荧光染料结合处有一个紫外光敏感的基团,被紫外光照射时,敏感基团断裂,导致荧光染料和报告探针断裂,然后被缓冲液洗掉,进行下一轮杂交)。在一轮杂交中,一个ISH探针若与特定的报告探针和荧光染料杂交,则发出相应颜色的荧光,若在这一轮没有与对应的报告探针杂交,则不发荧光。

       经过16轮杂交,每一个RNA分子在每一轮中是否发出荧光(0ᅠorᅠ1)以及发出荧光的颜色,会读出一个特定序列(即荧光Barcode序列),通过查询预先设计好的基因与barcode序列的对照表,就可以对空间原位基因进行定性。

 
 
        蛋白检测原理与基因检测原理相似,只不过蛋白检测用的是带有核酸标签链的抗体来识别目标蛋白(抗体相当于基因检测探针的Target binding domain区域;核酸标签链相当于Readout domain)。抗体结合到目标蛋白上,标签核酸链与报告探针以及荧光染料分子进行杂交,发出荧光信号。通过多轮循环的杂交,得到荧光barcode序列,然后查询蛋白与barcode序列的对照表,从而鉴定原位检测到的荧光点的蛋白种类。
 

蛋白检测原理

 
CosMx™ SMI工作流程

       CosMx™ᅠSMI提供了一个从样本制备到数据分析的完整检测分析流程,包括经过验证的试剂盒、超高分辨率下的成像仪器以及数据分析及可视化软件。并且工作流程简单,通过探针原位杂交,无需进行组织清除以及cDNA合成和扩增,能够更快地得到实验结果。其工作流程包括:

(1)样本制备:按照标准流程进行FFPE切片或新鲜冷冻切片的制备。
(2)探针杂交及形态学marker标记:对制备好的组织切片,进行原位杂交探针或带有核酸标签链的抗体杂交(使单个细胞中的基因或蛋白与特定的特异性RNA探针或抗体结合),并进行形态学marker标记(用于后续识别并界定细胞)。
(3)多轮杂交成像:组织切片放入CosMx™ SMI仪器中,进行多轮报告探针杂交和荧光成像。
 
工作流程

 
 
CosMx™ SMI产品优势
 
 
● 兼容多种样本类型:包括石蜡包埋组织、新鲜冻存组织、穿刺样本、组织切片、组织芯片等多种类型;
超多靶标检测:能够分析1000种RNA和64种蛋白靶标,覆盖多个研究领域,提供更全面的组织原位信息;
原位单细胞识别:结合核染、膜染、形态学标记染色和AI算法进行准确的单细胞边界识别和界定;
高灵敏度和高动态检测范围:可在单细胞水平捕获低拷贝数基因转录本;
亚细胞分辨率:可以对切片做三维立体的成像分析,达到亚细胞的分辨率;
经过验证、稳定可信的检测方法:所有CosMx蛋白检测试剂盒均经过广泛的抗体验证,具有较高特异性、灵敏度和整体性能;
建立一个全面的信息框架:利用自动半监督聚类算法对细胞进行分类和精细分型,并对细胞中RNA和蛋白进行原位可视化及定量分析,获得全面的组织原位信息;
应用领域广泛:适用于多个领域的研究,包括:肿瘤、神经、免疫以及药物开发等。

 
CosMx™ SMI产品应用
 
 
● 绘制细胞空间图谱:在空间背景下鉴定细胞类型、细胞状态、组织微环境表型和基因表达网络;
● 发现稀有细胞:实现更精细的细胞分型;
● 差异表达分析:基于空间背景的单细胞转录组及蛋白差异表达分析;
● 细胞邻域分析:全面揭示组织微环境;
● 细胞通讯:配体-受体相互作用,揭示细胞间的相互作用机制;
● 空间生物标志物的发现和验证:识别空间背景下的单细胞生物标记物。

 
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