产品详情
文献和实验
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库存 ：大量
英文名 ：Annexin V-FITC/PI Apoptosis Kit
保质期 ：1 年
供应商 ：北京百奥创新科技有限公司
保存条件 ：2~8℃
规格 ：20Assays/50Assays/100Assays
Annexin V-FITC / PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒
产品货号： E-CK-A211
产品规格： 20 Assays/50 Assays/100 Assays/200 Assays
检测原理
Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸PS有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合，将Annexin V标记荧光染料，利用流式细胞仪检测细胞凋亡。 细胞核染料（PI,DAPI,7-AAD）可与双链DNA特异性结合，并产生强烈的荧光，正常情况下无法透过细胞膜。由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性，细胞核染料（DAPI、PI、7-AAD）可进入细胞内对DNA进行染色，与Annexin V搭配使用，可区分处于不同凋亡时期的细胞。
本试剂盒检测喜树碱诱导的 Jurkat 细胞凋亡效果如下图所示：
保存条件：2~8℃可保存 1 年。Annexin V-FITC 禁止冷冻保存。
基本信息
| 应用类型 | 细胞凋亡-Annexin V |
| 检测方法 | 荧光 |
| 样本类型 | 细胞 |
| 检测时间 | 40min |
| 检测仪器 | 流式细胞仪 |
| 荧光 | FITC |
| Ex/Em (nm) | 490/530 |
| Channel set | FITC |
| 自备试剂 | PBS(E-BC-R187), 去离子水 |
| 保存温度 | 2~8°C, shading light |
| 运输条件 | 冰袋 |
| 保质期 | 12 months |
试剂配制：1×Annexin V Binding Buffer：取 1 mL Annexin V Binding Buffer (10×)加入 9 mL 去离子水中混匀。
实验操作：
一步法
1． 细胞按照实验方案进行凋亡诱导，300 ×g 离心 5 min，弃上清，收集细胞，PBS 洗涤一次，轻轻重 悬细胞并计数。
2． 取 1~5 × 105 重悬的细胞，300 ×g 离心 5 min，弃上清。用 PBS 洗涤细胞一次，离心后弃上清，加 入 500 μL 稀释的 1 × Annexin V Binding Buffer 重悬细胞。
3． 细胞悬液中加入 5 μL 的 Annexin V-FITC Reagent 和 5 μL 的 PI Reagent (50μg/mL)。
4． 轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育 15~20 min。
5． 立即上机检测。如不能及时检测，请于冰上避光静置并于 1 小时内完成检测。
注：流式细胞仪检测时 Annexin V-FITC 可用 FITC 通道，PI 优先选择 PerCP/Cy5.5 通道，其次是 ECD 通道。
两步法
1． 细胞按照实验方案进行凋亡诱导，300 ×g 离心 5 min，弃上清，收集细胞，PBS 洗涤一次，轻轻重 悬细胞并计数。
2． 取 1~5 × 105 重悬的细胞，300 ×g 离心 5 min，弃上清。用 PBS 洗涤细胞一次，离心后弃上清，加 入 100 μL 稀释的 1 × Annexin V Binding Buffer 重悬细胞。
3． 细胞悬液中加入 2.5 μL 的 Annexin V-FITC Reagent 和 2.5 μL 的 PI Reagent (50μg/mL)。（由于两步法 分辨率更高，染色液用量减半依然可得到媲美一步法的效果；用户亦可根据自己的模型进行滴定后 加入适量的染色液，用更少的量获得高质量的结果。）
4． 轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育 15~20 min。
5． 加入 400 μL 稀释的 1 × Annexin V Binding Buffer，混匀样本。
6． 立即上机检测。如不能及时检测，请于冰上避光静置并于 1 小时内完成检测。
注：流式细胞仪检测时 Annexin V-FITC 可用 FITC 通道，PI 优先选择 PerCP/Cy5.5 通道，其次是 ECD 通道。
注意事项
1. 本产品仅供科研使用。
2. 检测贴壁细胞时，需收集诱导凋亡后产生的悬浮细胞，并与后续收集的贴壁细胞一起检测。
3. 应尽量避免消化贴壁细胞带来的机械损伤。同时，胰酶的消化液中应尽量不含 EDTA，因为 EDTA 会影响 Annexin V 与磷脂酰丝氨酸的结合。
4. 如果使用含 EDTA 的胰酶，收集细胞后应充分清洗，确保 EDTA 被去除干净。
5. 染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
6. 荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽 量注意避光保存。
7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作
北京百奥创新科技有限公司
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