人类内源性逆转录病毒W家族RT-PCR

人类内源性逆转录病毒W家族RT-PCR

价格: ¥3490

品牌:gelatins

货号:JC-E4360

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库存 :大量

英文名 :人类内源性逆转录病毒W家族RT-PCR

CAS号 :

保质期 :6个月

供应商 :上海机纯实业有限公司

保存条件 :避光/低温保存

规格 :50次

人类内源性逆转录病毒W家族RT-PCR
产品及特点: 
人类内源性逆转录病毒(HERV)是存在于人类细胞 DNA 内并传给子细胞的病毒,是几百万年前整合到人类基因组中的逆转录病毒的残余物,约占了整个基因组的 8%。大部分 HERV 元件在进化过程中由于突变、缺失等的积累,已没有编码能力。但仍有少数由于正性选择的压力,完整的开放阅读框被保留了下来。HERV 家族可以分为三大类,γ逆转录病毒相关元件、β逆转录病毒相关元件、泡沫逆转录病毒相关元件。其中 W 家族属于γ逆转录病毒相关元件,分布于人类基因组的多条染色体上,这一类家族的活化主要与自身免疫性疾病以及神经系统疾病相关。本产品是根据 PCR 原理开发的人类内源性逆转录病毒 W 家族检测的试剂盒。
1. 一站式,用户不需要单独准备每种成分,包括引物和对照。
2. 根据人类内源性逆转录病毒W家族的保守基因序列设计的引物,具有良好的特异性。
3. 灵敏度可以达到1000拷贝/反应。
4. 使用一管式 RT-PCR 技术,RT 和 PCR 两步在一个试管内完成,不需要中间转移样品,降低了操作误差和可能的污染。
5. 本产品足够50次20μL体系的RT-PCR。
6. 本产品由江蓝纯生物提供,不得用于临床诊断。

规格及成分:
编号 成分 规格
试剂一 5×双酶一管式 RT-PCR Buffer 200 μL(橘黄盖)
试剂二 MMLV-Taq Mix 75 μL(红盖)
试剂三 超纯水 1 mL(亮黄盖)
试剂四 人类内源性逆转录病毒W家族RT-PCR 引物混合液 100 μL(白盖)
试剂五  人类内源性逆转录病毒W家族RT-PCR阳性对照(1×10E8 /μL) 50 μL(黄盖)
试剂六 使用手册 1 份
注:为避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供专一的DNA 片段作为阳性对照。 
运输及保存:
低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分开放置,因为其容易污染其他成分,造成假阳性。
自备试剂:
样品 RNA。
人类内源性逆转录病毒W家族RT-PCR
使用方法:  
一、样品 RNA 的制备: 

1. 如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL人类内源性逆转录病毒W家族PCR阳性对照的 1000 倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。
2. 用自选方法纯化N+2个样品的RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。可以选购本公司的柱式病毒RNAout。
二、设置 RT-PCR 反应(20μL 体系):  
3.如果有N+2个样品,则标记N+4个PCR管(额外增加的两个管一个是RT-PCR阳
性对照,另一个是RT-PCR 阴性对照)并按照下表在PCR管中加入下列成分:
成份 N+2 个
样品管
RT-PCR
阴性对照
RT-PCR
阳性对照
5×双酶一管式RT-PCR Buffer 各 4 μL 4 μL 4 μL
人类内源性逆转录病毒W家族RT-PCR引物混合液 各 2 μL 2μL 2μL
N+2个制备的 RNA 样品 各 12.5μL -- --
超纯水 -- 12.5μL --
人类内源性逆转录病毒W家族RT-PCR阳性对照的1000倍稀释液 -- -- 12.5μL
MMLV-Taq Mix 1.5 μL 1.5 μL 1.5 μL
4.上机进行 RT-PCR,RT-PCR 反应参数为:
过程 温度 时间
逆转录 42℃ 30 min
预变性 95℃ 5 min
PCR反应(35个循环) 95℃ 30 sec
58℃ 30 sec
72℃ 20 sec
延伸 72℃ 7 min
三、电泳检测: 
5. 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物,则说明实验失败,需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、阳性对照必须有预期条带出现,才有必要分析样品的实验结果,如果有预期片段大小的扩增产物则为阳性,如果无则为阴性。

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