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文献和实验
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库存 :大量
英文名 :禽白血病病毒通用RT-PCR试剂盒
CAS号 :无
保质期 :6个月
供应商 :上海机纯实业有限公司
保存条件 :避光/低温保存
规格 :50次
禽白血病病毒通用RT-PCR试剂盒产品及特点:
禽白血病(Avian Leukosis)是由禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus,ALV)引起的多种肿瘤性疾病的统称,这些疾病主要是淋巴白血病,其次是成红细胞白血病等。患鸡不但产生淋巴样肿瘤,其产蛋量还将下降。由于该病以垂直传播为主,故难以控制。它还使患鸡抵抗力下降后,容易感染多种其它疾病,给鸡群的饲养管理带来极大困难,所以禽白血病一直被认为是严重危害养禽业的最重要的禽病之一。禽白血病病毒属于反录病毒科禽 C 型反录病毒群,它还常常污染禽用疫苗、犬用疫苗,甚至人用疫苗,给生物制品工业、医学和生物学研究方面也造成巨大危害。本产品根据 PCR 原理开发,可用于科研领域快速检测禽白血病病毒。
1. 一站式,用户不需要单独准备每种成分,包括引物和对照。
2. 根据禽白血病病毒通用的保守基因序列设计的引物,具有良好的特异性。
3. 灵敏度可以达到1000拷贝/反应。
4. 使用一管式 RT-PCR 技术,RT 和 PCR 两步在一个试管内完成,不需要中间转移样品,降低了操作误差和可能的污染。
5. 本产品足够50次20μL体系的RT-PCR。
6. 本产品由江蓝纯生物提供,不得用于临床诊断。
规格及成分:
编号 | 成分 | 规格 |
试剂一 | 5×双酶一管式 RT-PCR Buffer | 200 μL(橘黄盖) |
试剂二 | MMLV-Taq Mix | 75 μL(红盖) |
试剂三 | 超纯水 | 1 mL(亮黄盖) |
试剂四 | 禽白血病病毒通用RT-PCR 引物混合液 | 100 μL(白盖) |
试剂五 | 禽白血病病毒通用RT-PCR阳性对照(1×10E8 /μL) | 50 μL(黄盖) |
试剂六 | 使用手册 | 1 份 |
运输及保存:
低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分开放置,因为其容易污染其他成分,造成假阳性。
自备试剂:
样品 RNA。
禽白血病病毒通用RT-PCR试剂盒
使用方法:
一、样品 RNA 的制备:
1. 如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL禽白血病病毒通用PCR阳性对照的 1000 倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。
2. 用自选方法纯化N+2个样品的RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。可以选购本公司的柱式病毒RNAout。
二、设置 RT-PCR 反应(20μL 体系):
3.如果有N+2个样品,则标记N+4个PCR管(额外增加的两个管一个是RT-PCR阳
性对照,另一个是RT-PCR 阴性对照)并按照下表在PCR管中加入下列成分:
成份 | N+2 个 样品管 |
RT-PCR 阴性对照 |
RT-PCR 阳性对照 |
5×双酶一管式RT-PCR Buffer | 各 4 μL | 4 μL | 4 μL |
禽白血病病毒通用RT-PCR引物混合液 | 各 2 μL | 2μL | 2μL |
N+2个制备的 RNA 样品 | 各 12.5μL | -- | -- |
超纯水 | -- | 12.5μL | -- |
禽白血病病毒通用RT-PCR阳性对照的1000倍稀释液 | -- | -- | 12.5μL |
MMLV-Taq Mix | 1.5 μL | 1.5 μL | 1.5 μL |
过程 | 温度 | 时间 |
逆转录 | 42℃ | 30 min |
预变性 | 95℃ | 5 min |
PCR反应(35个循环) | 95℃ | 30 sec |
58℃ | 30 sec | |
72℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 7 min |
5. 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物,则说明实验失败,需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、阳性对照必须有预期条带出现,才有必要分析样品的实验结果,如果有预期片段大小的扩增产物则为阳性,如果无则为阴性。
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