文献支持超高性价比，拒绝套路| EMSA、GST pull-down 限时钜惠

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凝胶迁移或电泳迁移率检测（Electrophoretic Mobility Shift Assay，EMSA）是一种检测蛋白质和DNA序列相互结合的技术，可用于定性和定量分析。目前已用于研究DNA结合蛋白和特定的DNA序列的相互作用，是转录因子研究的经典方法。

GST pull-down技术利用带有标签的已知蛋白作为诱饵蛋白（最常用的是GST标签，即谷胱甘肽巯基转移酶，glutathione S-transferase），诱饵蛋白特异性结合谷胱甘肽亲和树脂，当目的蛋白溶液过柱时，将诱饵蛋白及其相互作用的蛋白复合物捕获。复合物洗脱后，通过蛋白凝胶电泳分析两种蛋白间的相互作用，或者筛选相应的目的蛋白。

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随着2024的临近，2023年即将进入最后1个月。为了感谢广大新老客户对金开瑞长期以来的支持和信任，我们特别推出了EMSA、GST pull-down限时钜惠活动（全年最低，就这一次），欢迎垂询~

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案例展示

EMSA的常见问题及解答

问：EMSA实验中，为何看不到DNA与蛋白的复合物带？

答：EMSA实验中看不到DNA与蛋白的复合物带，可能的原因包括：

蛋白样本提取质量不高，如蛋白降解或提取量不足。
样本中没有可以与探针结合的蛋白。
探针与蛋白无特异性的相互作用。
转膜效率低，导致蛋白或探针未有效转移到膜上。
曝光或成像时间过短。

问：如何判断EMSA实验中蛋白质与DNA的结合是否成功？

答：通过比较加入蛋白质前后的DNA迁移速率，可以判断蛋白质与DNA的结合是否成功。如果加入蛋白质后，DNA的迁移速率明显降低，说明蛋白质与DNA成功结合。

问：如何确定EMSA实验中探针是否纯净，没有杂质？

答：确定探针是否纯净，没有杂质，可以通过设立对照组来实现。在对照组中，只加入探针而不加入其他成分，观察探针在凝胶中的迁移情况。如果探针的位置位于最下方，且没有其他非特异性条带出现，则可以认为探针是纯净的。

问：EMSA实验中，非特异性条带出现的原因是什么？如何减少？

答：非特异性条带的出现可能是由于蛋白质与DNA的非特异性结合或实验操作中的误差所致。为了减少非特异性条带的出现，可以尝试优化实验条件，如降低蛋白质浓度、增加DNA浓度或调整反应时间等。

问：如何验证EMSA实验中蛋白质与DNA结合的特异性？

答：验证EMSA实验中蛋白质与DNA结合的特异性，可以使用特异性抗体进行验证。如果抗体能够特异性地识别并结合到蛋白质-DNA复合物上，则说明该结合是特异的。此外，增加实验重复次数和进行对照实验也是排除假阳性结果的有效方法。

GST pull-down的常见问题及解答

问：GST pull-down有哪些常见问题？
答：常见问题包括假阳性结果的出现、非特异性互作、实验温度和时间的选择、以及GST标签对实验结果的影响等。

问：如何减少GST pull-down中的假阳性结果？
答：为了减少假阳性结果，可以通过添加更多的非离子型洗涤剂和用特定的pH缓冲液来消除非特异性的互作。同时，在检测前用0.1%的Tween-20（或其他洗涤剂）处理GST-beads，以及选择适合的阴性对照组（如不含目的蛋白的空GST蛋白）也有助于减少假阳性结果。

问：GST标签对实验结果有哪些影响？
答：虽然大多数情况下认为GST标签不会对下游蛋白的折叠和功能造成影响，但实际上GST标签有可能会影响蛋白的正确折叠。因此，对融合蛋白进行质量控制，会使实验结果更加可信。

问：如何避免非特异性互作？
答：为了避免非特异性互作，可以在实验过程中加入更多的非离子型洗涤剂和用特定的pH缓冲液，以及在检测前用0.1%的Tween-20（或其他洗涤剂）处理GST-beads。

问：GST pull-down实验可以应用于哪些方面？
答：GST pull-down实验可以用于验证两种已知蛋白可能存在的直接互作关系，也可以用于寻找可能与目标蛋白存在相互作用关系的未知蛋白。此外，它还可以与其他实验方法（如Western blot、LC-MS等）结合使用，以更深入地研究蛋白间的相互作用。