特殊组织包埋

提供商 ：浙江亦高生物科技有限公司

服务名称 ：特殊组织包埋

产品介绍:
新鲜组织经过固定取材脱水透明浸蜡后用特定的包埋模具将前期处理的组织块与融化的石蜡一起包埋成组织蜡块的过程称为
组织取材包埋。

实验流程:
(1)样本接收:固定好的组织
(2)实验步骤:取材-脱水-透明-浸蜡包埋
(3)实验结果:组织蜡块

注意事项:
1、新鲜组织尽快放入固定液固定
2、固定液的体积至少是固定组织体积的10倍
3、组织取材厚度1-3mm

猫 部分显露肌梭包埋为例

固定

将取出的肌肉置于含5% 戊er醛的 0.1mol/l二甲SHEN酸Na缓冲液内，PH 值为7.2,原位固定5min(戊er醛常由25%溶液
稀释而成。因其易聚合，所以使用之前应保存于4℃以下)。
将肌纤维切成10mm长，以确保至少含有一个肌梭，用上述相同固定液再固定4~14d(总固定时间因实验室而异，固定时间
的差异一般不会明显影响固定效果)。
缓冲液清洗30 min.
置于缓冲液配制的1% 四氧化e固定4h(四氧化e渗透速度很慢，但薄短筒状肌的厚度小于1mm，4h足以充分固定。一般
将四氧化e配成 2%的储存液，装瓶并密封后储存于冰箱内。配制固定液时，向储存液内加入等量的0.2mol/L二甲SHEN酸
钠缓)中液，便稀释成了所需的终浓度)。

脱水和包埋

室温下将标本用 70%、95%和100%(两次)的梯度乙醇脱水，每次10 min.
用1:1的乙醇与环Y丙烷(1,2-环Y丙烷)混合液处理15 min[环Y丙烷常用作中间溶媒，在石蜡包埋法中发挥类似「透明
剂」的作用。大多数透明剂的折射指数与脱水蛋白及其他细胞内成分相似。该名称的由来是因为最初它们被用来固定透明的
组织，虽然现在知道它们几乎没有这样的功能，但这个名称一直沿用至今。其他脱水方法见Glauert(1975)]。
环氧丙烧处理15 min.
用 1:1的环氧丙烧与Epon 的混合物(除了加速剂以外的成分)浸透，置入敞口的容器内，通风橱内过夜(挥发的环Y丙烷
能帮助硬化剂更好地向组织块渗透)。
倒掉瓶内剩余的渗透媒质，移入新鲜的纯 Epori 中。
将切片平整地包埋于内衬铝箔的模具内，先45C聚合 12 h,再60C聚合 24h

切片和染色

借助常规玻璃刀用超薄切片机手动切片，片厚1/um，每10张切片收集为1组(如需要，可用带氯仿蒸气的刷子靠近切片或
通过电热丝的辐射热使切片平铺于水面上。玻璃刀应该经常更换，更换时应注意玻璃刀的准确复位，使用机械开关控制刀的
运动以确保连续切割时能得到相同的切片。由于刀与组织块表面间的距离仅有几个微米，为了在更换新刀后仍能准确定位，
可将刀背照亮，此时刀刃与组织块表面的缝隙看起来呈一条亮线)。
用钻石刀将盖玻片(标准尺寸为50 mmX20 mm)切割成3 mm宽的窄条，将窄条的一端浸入液面下直接从水槽内收集切片
(图1-1A)(这些切片有的排列成串，有的单独存在。用一根粘有睫毛的牙签可以很容易地将切片导入窄条的表面，窄条需用
钟表镊夹持,将窄条的一面靠近切片呈舌尖样伸出的一端，再使切片干燥，这个方法既简便又能使切片很好地粘附在窄条玻
片上)。
用软的织物将窄条的背面擦干，任切片漂浮在窄条前端的水滴中。
用一块温度约为70"C 的热板使切片干燥并贴附于窄条表面[最好将一块玻璃载玻片永久性地固定于热板上，而将窄条置于
载玻片上烘干(图I-IB)]。
用甲苯胺蓝(toluidineblue)(图1-2A)和派罗宁(pyronine)(图1-2B) 在尚pH 值条件下染色，将一滴染液滴于切片表面，加
热直到染液滴从边缘处开始干燥为止。水洗后用95%乙醇分色[染料配制:将0.1g甲苯胺蓝、0.05g派罗宁和 0.1g硼砂
(四硼酸钠)溶于60ml蒸馏水即可，配好的染液应定期过滤]。
在热板上干燥后用DPX[distrene(聚苯乙烯)-plasticizer(塑化剂)-xylene(二甲苯)]封片[一张载玻片上放置5个窄条，每个窄
条有 10张切片，用50 mmX22 mm的盖玻片封片(图1-1C)。当然，封片时应注意将贴有切片的一面朝上]。