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文献和实验
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保存条件 ：避光/低温保存
保质期 ：12个月
英文名 ：圣路易斯脑炎病毒RT-PCR试剂盒
库存 ：大量
供应商 ：上海晶抗生物工程有限公司
CAS号 ：无
规格 ：50次
圣路易斯脑炎病毒RT-PCR试剂盒产品及特点：
圣路易斯脑炎病毒(St.Louis Encephalitis Virus，SLEV)是一种 RNA 病毒，会引起圣路易斯型脑炎，多数患者症状轻微，表现为发热、头痛、咽痛、肌痛，数天后即完全恢复。约 40%的儿童和青年患者仅仅有发热和头痛，或者为无菌性脑膜炎的表现。少数患者出现明显的脑炎症状和体征，包括颈项强直、意识障碍和局灶性神经系统症状，严重者可出现昏迷。部分患者留有较轻的后遗症。高龄是病死的高危因素，致死风险随年龄增加而增加，目前尚无特殊治疗，采取支持、对症治疗，加强护理，因此快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。本产品是根据 PCR 原理开发的圣路易斯脑炎病毒检测的试剂盒。
1. 一站式，用户不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。
2. 根据圣路易斯脑炎病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。
3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。
4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。
6. 本产品只能用于科研，不能用于临床。
规格及成分：
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 5×双酶一管式 RT-PCR Buffer | 200 μL（橘黄盖） |
| 试剂二 | MMLV-Taq Mix | 75 μL（红盖） |
| 试剂三 | 超纯水 | 1 mL（亮黄盖） |
| 试剂四 | 圣路易斯脑炎病毒 RT-PCR 引物混合液 | 100 μL（白盖） |
| 试剂五 | 圣路易斯脑炎病毒 RT-PCR 阳性对照（1×10E8 /μL） | 50 μL（黄盖） |
| 试剂六 | 使用手册 | 1 份 |
运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。
自备试剂：
样品 RNA。
圣路易斯脑炎病毒RT-PCR试剂盒
使用方法：
一、样品 DNA 的制备：
1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 圣路易斯脑炎病毒 PCR阳性对照的 1000 倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。
2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂盒兼容。可以选购本公司的柱式病毒 RNAout。
二、设置RT-PCR反应(20 μL 体系)：
3. 如果有 N+2 个样品，则标记 N+4 个 PCR 管（额外增加的两个管一个是RT-PCR 阳性对照，另一个是 RT-PCR 阴性对照）并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：
| 成份 | N+2 个 样品管 |
RT-PCR 阴性对照 |
RT-PCR 阳性对照 |
| 5×双酶一管式RT-PCR Buffer | 各 4 μL | 4 μL | 4 μL |
| 圣路易斯脑炎病毒 RT-PCR 引物混合液 | 各 2 μL | 2μL | 2μL |
| N+2 个制备的 RNA 样品 | 各 12.5μL | -- | -- |
| 超纯水 | -- | 12.5μL | -- |
| 圣路易斯脑炎病毒 RT-PCR 阳性对照的 1000倍稀释液 | -- | -- | 12.5μL |
| MMLV-Taq Mix | 1.5 μL | 1.5 μL | 1.5 μL |
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 42℃ | 30 min |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
| PCR反应35个循环 | 95℃ | 30 sec |
| 58℃ | 30 sec | |
| 72℃ | 20 sec | |
| 最后延伸 | 72℃ | 7 min |
5. 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物，则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、阳性对照必须有预期条带出现，才有必要分析样品的实验结果，如果有预期片段大小的扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。
所有产品仅供科研使用，不得用于其他用途。
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