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文献和实验
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库存 ：大量
英文名 ：Anthocyanin Reductase (ANR) Kit
CAS号 ：WS6001W
保质期 ：3个月
供应商 ：上海瓦兰生物
保存条件 ：4℃
规格 ：48T/96T
本试剂盒仅供科研使用
花青素还原酶（anthocyanidin reductase，ANR）试剂盒说明书
（货号：WS6001W 微板法 96 样）
一、产品简介：
花青素还原酶（ANR）参与调控花青素的含量水平以及原花青素的形成，是原花青素
单体生物合成过程中关键酶之一，在花青素积累过程中具有重要的调节作用。
花青素还原酶（ANR）在NADPH存在下使飞燕草色素转变为表没食子儿茶素和NADP+，
通过检测反应体系在 340nm 处的吸光值下降速率即可得出花青素还原酶（ANR）活性大小。
二、试剂盒组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 110mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉剂 mg×1 支
-20℃保存
用前甩几下或离心使粉剂落入底部，再
加 1.2mL 蒸馏水溶解备用。
试剂二
粉剂 mg×2 支
-20℃保存
用前甩几下或离心使粉剂落入底部，每
支分别加 0.6mL 蒸馏水溶解备用。用不
完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复
冻融，三天内用完。
试剂三
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
试剂四
粉剂μg×1 支
-20℃避光
保存
用前甩几下或离心使粉剂落入底部，再
加 1.1mL 乙醇溶解备用，用不完的试剂
分装后-20℃避光保存，禁止反复冻融。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、台式离心机、无水乙醇、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰。
四、花青素还原酶（ANR）活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约 0.1g 组织样本，加入 1mL 提取液，冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心 10min，
取上清置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
② 液体样本：若液体澄清可直接检测；若浑浊则 12000rpm，4℃离心 10min，取上
清置冰上待测。
2、上机检测：
1
酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm。
2 所有试剂解冻至室温（25℃）。
3
在 96 孔板中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
样本
20
试剂一
10
试剂二
10
试剂三
150
340nm，室温（25℃）孵育 5min本试剂盒仅供科研使用
2
试剂四
10
充分混匀，立即于 340nm 处读取吸光值 A1，后于 40℃温育 20min
后，再读取吸光值 A2，△A=A1-A2。
【注】1. 若ΔA 的值在零附近徘徊，可增加样本加样量 V1（如增至 40μL，则试剂三减少至 130μL），
则改变后的 V1 需代入计算公式重新计算。
2. 若起始值 A1 太大如超过 2（如颜色较深的组织样本，一般色素较高，则起始值相对会偏高），
可以适当减少样本加样量 V1(如减至 10μL)，则改变后的 V1 需代入计算公式重新计算。
3. 若ΔA 的值大于 0.2，则需减少反应时间（如 40℃温育 20min 减少至 10min），则改变后的反
应时间 T 需代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、按样本蛋白浓度计算
酶活定义：40℃条件下，每毫克组织蛋白每分钟氧化 1nmolNADPH 定义为一个酶活单位。
ANR 活性（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷(V1×Cpr) ÷T
=160.8×ΔA÷Cpr
2、按样本鲜重计算
酶活定义：40℃条件下，每克组织每分钟氧化 1nmolNADPH 定义为一个酶活单位。
ANR 活性（nmol/min/g 鲜重）=[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷(W×V1÷V) ÷T
=160.8×ΔA÷W
3、按液体体积计算
酶活定义：40℃条件下，每毫升液体每分钟氧化 1nmolNADPH 定义为一个酶活单位。
ANR 活性（nmol/min/mL）=[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷V1÷T
=160.8×ΔA
V---加入提取液体积，1 mL；
V1---加入样本体积，0.02mL；
V2---反应体系总体积，2×10-4 L；
d---96 孔板光径，0.5cm；
ε---NADPH 摩尔消光系数，6.22×103 L/mol/cm；
W---样本质量，g；
T---反应时间，20min；
Cpr---蛋白浓度（mg/mL），建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒。
上海瓦兰生物科技有限公司
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金牌会员
入驻年限：11年
