RNApure 超纯总 RNA 快速提取试剂盒 (DNase I)

库存 ：34

保质期 ：12个月

供应商 ： 上海邦景

保存条件 ：2-8℃

规格 ：20 次/50 次

商品属性：

产品名称	货号	规格	价格
RNApure 超纯总 RNA 快速提取试剂盒 (DNase I)	BJ-PJ6324	20 次	686.4
RNApure 超纯总 RNA 快速提取试剂盒 (DNase I)	BJ-PJ6324	50 次	1388.4

描述：

保存条件：本产品收到后按照上面指示温度存放各成份，储存 12 个月不影响使用效果。

注意：
1.所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度过低，溶液可能会形成沉淀，此时不应该直接使用，可在 37℃水浴加热，直至溶液恢复澄清。
2.不合适的低温（4℃或者-20℃）储存会造成溶液沉淀，影响使用效果。裂解液 RL 可以常温运输，收到后 4℃避光保存。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：
改进的异硫酸胍/酚一步法裂解细胞和灭活 RNA 酶，然后总 RNA 在高离序盐 状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的 RNase free H2O 将纯净 RNA 从硅基质膜上洗脱。
产品特点：
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.结合了异硫酸胍/酚一步法试剂稳定性好，纯度高和离心柱方便快捷的优点， RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。
3.独有的 RL 裂解液配方，可以有效的消除基因组污染。
4.有效的去除了 5S 在总 RNA 中含量，提高了纯度。
注意事项：
1.第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
2.为防止RNA降解，所有离心步骤如未加说明，均在4℃低温进行。使用转速可以达到12,000 rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C或者类似离心机。
3.裂解液RL和去蛋白液RE中含有刺激性有害化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4.考虑到环保问题，本试剂盒不含有实验室常用试剂氯仿，用户使用前需要自备氯仿。
5.常规的琼脂糖凝胶电泳和变性胶电泳均可以用来分析RNA的质量。好的RNA产物在电泳后应该可以看到明显的二条优势核糖体RNA带，分别为~5Kb（28S），~2Kb（18S），条带亮度比值约为2：1。有时候也可以看到~0.1kb和0.3Kb(5S，tRNA)带。但有时候根据不同的物种如某些植物组织可以看到4，5条带也属于正常现象，如果RNA未成熟的前体或者不均一核RNA、小核RNA提取出来也可能看到介于7Kb和15Kb之间的不连续的高分子量条带。
6.检测OD260/OD280吸光度比值时，RNA样品应该溶于TE后检测，如果用水稀释后检测，由于一般水离子强度和PH值低，会使OD280升高，从而使比值降低。
7.加入裂解液RL匀浆后，加氯仿前，样品可在 -70℃至-80℃保存一个月。
自备试剂：氯仿、无水乙醇
操作步骤：
1.匀浆处理
a.组织
用玻璃或强力匀浆器搅匀组织样品，保存于液氮内样品需要用研钵磨碎，每50~100 mg组织加1 ml的裂解液RL后匀浆。组织样品容积不能超过RL容积的10%。
b.单层生长的细胞
直接往直径3.5 cm的培养板中加入1 ml的RL溶解细胞，并用移液枪轻轻吹打混 匀。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的RL量（每10 cm2加1 ml）。 一般情况下，普通大小的细胞培养瓶，加入1 ml的RL，迅速轻摇使RL充分和瓶底所 有细胞接触裂解细胞并灭活RNA酶，轻轻用移液枪反复吹打混匀。当RL用量不足时 可导致抽提的RNA中有基因组DNA污染。
c.悬浮生长的细胞
通过离心来沉淀细胞。在RL试剂中用移液枪反复吹打来裂解细胞。每5~10×106 的动物细胞，植物或酵母菌细胞或每1×107细菌加1 ml的RL。在加入RL前应避免洗涤细胞，否则会增加mRNA降解的可能性。破裂某些酵母菌和细菌可能需要使用匀浆器。
2.将匀浆样品剧烈震荡混匀，在15 -30°C条件下孵育5 min以使核蛋白体完全分解。
3.每1 ml RL加0.2 ml氯仿。盖紧样品管盖，剧烈振荡15 sec并将其在室温下孵育3 min。
4.于4℃12,000 rpm 离心10 min，样品会分成三层：下层有机相，中间层和上层无色的水相，RNA存在于水相中。水相层的容量大约为所加RL体积的60%，把水相转移到新管中，进行下一步操作。
5.加入1倍体积70％乙醇（请先检查是否已加入无水乙醇!），颠倒混匀（此时可能会出现沉淀）。得到的溶液和可能沉淀一起转入吸附柱RA中（吸附柱套在收集管内）。
6.12,000 rpm 离心45 sec，弃掉废液，将吸附柱重新套回收集管。
7.加400 μl去蛋白液RE，12,000 rpm 离心45 sec，弃掉废液。
8.DNase I工作液的配制：取10 μl DNase I储存液放入新的RNase-free离心管中，加入70 μl RDD溶液，轻柔混匀。
9.向吸附柱RA中央加入80 μl DNase I工作液，室温放置15 min（一般情况下室温放置可得到较好的消化效果，如果室温效果不佳可选择在37℃放置15 min）。
10.加400 μl去蛋白液RE，12,000 rpm 离心45 sec，弃掉废液。
11.加入500 μl漂洗液RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000 rpm 离心45 sec，弃掉废液。
12.加入500 μl漂洗液RW，12,000 rpm 离心45 sec，弃掉废液。
13.将吸附柱RA放回空收集管中，12,000 rpm离心2 min，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
14.取出吸附柱 RA，放入一个 RNase free 离心管中，根据预期 RNA 产量往吸附膜的中间部位加 50-80 μl RNase free H2O（事先在 65℃水浴中加热效果更好），室温放置 2 min， 12,000 rpm 离心 1 min。如果需要较多 RNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，离心 1 min。对于 RNA 含量少（≤5 μg）的样品，可以选择购买本公司微量 RNA 吸附柱，此吸附柱最小洗脱体积为 5 μl，可提高 RNA 的洗脱浓度，帮助后续实验的进行。

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