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库存 :46
保质期 :12个月
供应商 : 上海邦景
保存条件 :2-8℃
规格 :200U
商品属性:产品名称 | 货号 | 规格 | 价格 |
Extreme Thermostable Rnase HII(极耐热Rnase HII) | BJ-PJ6692 | 200U | 1872 |
描述:
该 RNase H2 是来源于极端耐热的菌株的内源性核酸内切酶,它识别 RNA/DNA 杂交链并切割 RNA 链,其对单链 RNA 切割活性极低,且对 dsDNA、ssDNA 无切割活性。该酶在 DNA/RNA duplex 的单核糖核苷酸残基
处从 5’端进行切割,切割后产生一个 5′端磷酸基团和一个3′端羟基。该 RNase H2 酶在 60-70°C 具有最佳活性,在 50°C 到 75°C 间均具有活性,但其在室温下活性非常低。该酶极度耐热,在 95°C 加热 30min 后仍保留全部活性,因此其与大多数的 PCR 缓冲体系兼容,可用于 RnaseHII 依赖性 PCR(rhPCR)等实验。
储存:-20°C 可保存 2 年。
单位定义:一个单位是指在 60°C 下,15 分钟切割 1nmol含有单个 RNA 的嵌合 DNA/RNA 杂交双链体底物所需的酶量。
本品为高浓度制品:使用时通常需要先用 15%甘油稀释到 2U/μl 后使用。
10XET RNase H2 Buffer: 200mM Tris-HCl, 500mM KCl,1% Tween20, 200ug/ml BSA, 50mM Mg2+, pH8.5.
使用方法(一)
DNA/RNA 杂交链 10-200pmol
10XET RNase H2 Buffer 2 μl
ET RNase H2 (2U/μl) 0.5 μl
ddH2O Up to 20 μl
50-70°C 反应 15min。
使用方法(二)-rhPCR 扩增
10XPCR Buffer 2 μl
10μM Blocked PrimerF 0.4 μl
10μM Blocked PrimerR 0.4 μl
Taq DNA Polymerase 0.5Unit
ET RNase H2 (2U/μl) 0.5 μl
DNA 模板 1 μl
ddH2O Up to 20 μl
反应:95°C 1min,循环 45 次(95°C 10s,60°C 30s)。
注意事项
1. 该酶在 50-75℃均有活性,其用量可根据不同的应用进行调节,该酶在室温 25 度情况下活性极低。
2.该酶用于 rhPCR(依赖于 Rnase H2 的 PCR )时,需要使用 3′ 端带封闭基团的 DNA 引物(Blocked 引物)。引物 3’端可以采用 C3 Spacer 或 NH2 封闭,3’末端第 5位为单碱基的 RNA 碱基。
3. 该酶与绝大多数的 PCR 缓冲体系兼容,最佳 mg2+浓度 2~3mM。
4. 该酶极其耐热,95℃30min 活性无显著降低,故不可通过热失活,0.1% SDS 可将其失活。
5. 在 rhPCR 中推荐的使用浓度为 10~50mU/μl。
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