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库存 :41
保质期 :12个月
供应商 : 上海邦景
保存条件 :2-8℃
规格 :1000U
商品属性:产品名称 | 货号 | 规格 | 价格 |
Dnase I(Rnase free) | BJ-PJ6678 | 1000U | 624 |
描述:
该酶是将单链或双链 DNA 同等程度的随机分解,生成具有 5′-P 末端寡核苷酸的脱氧核糖核酸内切酶。由于RNase-free DNase I 中 Protease 已几乎被完全去除,从而提高了该酶在 pH 中性区域的稳定性。此外该酶中添加了Rnase Inhibitor,用于抑制 RNA 样品中残留的 RNase 核酸酶,因此可以有效抑制 RNA 提取过程中 Rnase 酶对 RNA的降解。Stop Buffer 终止反应后,可通过一步加热失活DNase I 活性。
活性定义
在 50 μl 体系下,37℃ 10min 条件下完全消化 1 μg pBR322质粒 DNA 所需的酶量定义为 1 个活性单位。纯度
2 U 的本酶和 1 μg 的 16S, 23S rRNA 在 37℃、pH7.5 的条件下反应 1 小时,RNA 的电泳谱带不发生变化
应用:去除 RNA 样品中的 DNA 污染。
储存:-20°C 可保存 2 年。
操作方法(去除 RNA 中的基因组 DNA 污染)
1. 按以下组分配制反应体系
RNA 1~50 μg
10× RD Buffer 2 μl
Rnase Free DNase I (2 U/μl) 1 μl*
Rnase Free H2O Up to 20 μl
*若 RNA 样品中含有超过 5 μg 基因组 DNA 污染,请使用2 μl 该酶。
2. 37°C 孵育 15min 以消化去除基因组 DNA。
3. 孵育完毕后加入 2 μl 10× RD Stop Buffer,混合均匀室温放置 1min,并置于 75°C 10min 加热失活 DNase I。样品可直接用于下一步反转录等试验。
注意:
1)通常加热方法即可失活 DNase I。如需要去除残留的变性蛋白,可在 37°C 消化完毕后使用酚氯仿抽提并沉淀 RNA样品(不进行加热操作)。
2)10× RD Stop Buffer 中含有螯合剂用于去除二价阳离子,进行加热失活前,必须加入 2 μl 10× RD Stop Buffer 并混合均匀,再进行热失活,否则会导致 RNA 降解。
3)处理完毕的 RNA 样品进行一步反转录反应时,添加量需要<20%(如 20 μl 的反转录体系中加入量要<4 μl)
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