口腔 / 咽拭子基因组 DNA 快速提取试剂盒

库存 ：43

保质期 ：12个月

供应商 ： 上海邦景

保存条件 ：2-8℃

规格 ：50 次

商品属性：

产品名称	货号	规格	价格
口腔 / 咽拭子基因组 DNA 快速提取试剂盒	BJ-PJ6359	50 次	858

描述：
保存条件：本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。
产品介绍：
本试剂盒采用特制的进口 DNA 吸附柱和独特的缓冲液系统，特别适合于从口腔咽拭子中分离纯化基因组 DNA。各种来源样品裂解消化处理后 DNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜（特别配备了 Carrier RNA 可以从体系中轻松捕获微量核酸），再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的基因组 DNA 从硅基质膜上洗脱。纯化后的 DNA无杂质和 PCR 抑制剂，可直接适用于 PCR 分析。
产品特点：
1.配备了 Carrier RNA 用于充分收集特别微量 DNA。
2.提取的 DNA 纯度高，质量稳定可靠，可适用于各种常规操作，包括 PCR、酶切、测序、Southern 杂交等。
注意事项：
1.结合液 CB 或者抑制物去除液 IR 低温时可能出现析出和沉淀，可以在 37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH 值变化。
3.Carrier RNA
a.Carrier RNA 使用方法：如果起始处理量很少（口腔咽拭子上收集到的细胞很少），我们推荐使用 Carrier RNA，如果预期有较大量 DNA 产量，用户可以根据需要选择是否加入 Carrier RNA。使用时每个样品提取所需结合液 CB 中加入 1μl Carrier RNA 储存溶液，将结合液 CB 与 Carrier RNA溶液充分颠倒混匀即可(结合液 CB 容易起泡沫,请勿使用涡旋振荡混匀)。也可根据样品数量，在总共需要的结合液 CB 中加入总共需要的 Carrier RNA 混匀备用。混合液在室温 24 小时内稳定。
b.Carrier RNA 加入过多造成 DNA 洗脱液中 Carrier RNA 浓度过高，下游 PCR 反应可能受干扰，加入过少可能并不能帮助提高 DNA 产量和 PCR 敏感度，因此加入量应该在具体试验中调整以得到最佳效果。
自备试剂：无水乙醇
操作步骤：
提示：第一次使用前请先在 15ml 漂洗液 WB 中加入 60ml 无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
取样：取一根医用消毒棉签（手不要碰触脱脂棉部位），伸进口腔，紧靠脸颊内侧来回刮拭 20 次（不时旋转棉棒），需充分接触口腔粘膜。
注意：避免用手触及棉签，采集前可先用清水轻轻漱口。为防止样本被食物或者饮料污染，取样前 30 min 内应该避免进食或者饮水。
1.用剪刀将棉签部分从其杆上剪下，放入 2ml 离心管中，加入 400μl 裂解液 ML。
2.再加入 20μl 的蛋白酶 K (20mg/ml)溶液，立刻涡旋振荡充分混匀，56℃放置 30 min，期间每 10 min 涡旋混匀 10 sec。
3.加入 400μl 结合液 CB，立刻涡旋振荡充分混匀，70℃放置 10 min（挤压去除拭子，
将尽可能多的裂解液转移至新的离心管中）。如果拭子上细胞数量少，导致提取的基因组 DNA 产量过低, 可以在 400μl 结合液 CB中加入 1μl Carrier RNA 储存溶液。
4. 冷却后加 200μl 无水乙醇，立刻涡旋振荡充分混匀。简短离心以除去管盖内壁的液滴，收集所有的液体到管底。（如果周围环境高于 25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入）
5.将上一步混合物中加入一个吸附柱 AC 中（吸附柱放入收集管中），12,000rpm 离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液。
6.加入 500μl 抑制物去除液 IR，12,000rpm 离心 30 sec，弃废液。
7.加入 500μl 漂洗液 WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心 30 sec，弃掉废液。
8.重复操作步骤 7。
9.将吸附柱 AC 放回空收集管中，12,000rpm 离心 2 min，将吸附柱置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
10.取出吸附柱 AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加 20-50μl 洗脱缓冲液 EB（洗脱缓冲液事先在 65-70℃水浴中预热效果更好），室温放置 1 min，12,000rpm 离心 1 min。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置 1 min，12,000rpm 离 心 1 min 。 洗 脱 体 积 越 大 ， 洗 脱 效 率 越 高 ， 如 果 需要 DNA 浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于 20μl，体积过小降低 DNA 洗脱效率，减少 DNA 产量。
（注意:DNA 产物应保存在-20℃，以防 DNA 降解）DNA 浓度及纯度检测得到的基因组 DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA 应在 OD260 处有显著吸收峰，OD260 值为 1 相当于大约 50μg/ml 双链 DNA、40μg/ml 单链 DNA。OD260/OD280比值应为 1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用灭菌水比值会偏低，因为 pH 值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

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