双萤光素酶报告基因检测

提供商 ：上海研匠生物科技有限公司

服务名称 ：双荧光素酶报告基因检测

                                                                                         双萤光素酶报告基因检测

1.服务简介
  荧光素酶报告基因系统是以荧光素（luciferin）为底物来检测萤火虫荧光素酶（fireflyluciferase） 活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成 oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光（bioluminescence），可通过荧光测定仪设备测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光，常应用于启动子转录活性调控及miRNA靶基因验证等方向研究。
2.服务内容

1. 验证miR同mRNA靶向互作。将待测mRNA的预测靶向序列插入报告基因载体，再共转入该miR mimics，如果萤光素酶活性下降，则提示为其靶序列。
2. 验证miR同lncRNA靶向互作。将候选的lncRNA预测靶向序列插入报告基因载体中F-Luc的3’UTR区域，检测萤光素活性。
3. 启动子结构分析。将启动子区域序列（通常2k左右）进行分段截短，或对特定位点进行突变，再分别构建入luciferase报告载体中替换启动子序列，检测其启动子活性。
4. 验证特定转录因子同其调控序列的作用。将该序列（通常为启动子区域）插入报告基因载体，同时在实验细胞中共转过表达该转录因子，可分析转录因子过表达是否提高萤光素酶活性。

3.可供选择的载体-表3

编号	可提供的载体名称
1	pGL4.17[luc2/Neo] 信号通路报告载体
2	pLuc2-hRluc(pGL4.10-hRluc) 信号通路报告载体 双荧光素酶luc2+hRluc
3	pGL3-hRluc 双荧光素酶报告基因载体同时含有萤火虫荧光luc+和海肾荧光Rluc
4	pGL3-basic 荧光素酶报告基因载体（萤火虫荧光）
5	pmirGLO，pMir-Glo circRNA 3'UTR miRNA功能研究载体，荧光素酶报告系统质粒

附1：双荧光素酶报告基因的应用：
 

1. 你是否正在验证miRNA与lncRNA的作用机制？
2. 是否在分析确认miRNA的靶基因？
3. 在研究转录因子和启动子的实验中，你是否想确定结合位点的序列？
4. 这些问题都可以用双荧光素酶报告基因检测系统来尝试解决。

附2：影响双荧光素酶报告基因检测的因素：

坑1：检测数值太低
正常表达水平下，荧光值的数量级应在104-107数量级左右，导致数值低主要有以下几个原因：启动子活性、转染效率低、裂解不充分、底物失效、操作不规范等原因：

坑2. 复孔差异大
双报告基因检测系统较为灵敏，检测结果受多种因素的影响，因此，一般设置3个或3个以上的复孔，复孔之间有差异是正常的，差异在同一个数量级可以接受。想要得到更准确的实验结果，需尽量减少复孔的差异性，建议如下：1、裂解后建议离心取上清，保证样本均一性；2、保证加样的准确性；3、样品和底物混合后到检测前的时间以及检测时间应控制在相同的时间内。

附3：实验流程

附4：结果展示：