CCK-8检测细胞增殖

提供商 ：上海研匠生物科技有限公司

服务名称 ：CCK-8检测细胞增殖

一、技术简介

Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验
CCK8的优点：使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；CCK-8法能快速检测；CCK-8法的检测灵敏度很高，甚至可以测定较低细胞密度；CCK-8法的重复性优于MTT 法；CCK-8法对细胞毒性小；CCK-8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。

二、实验流程
1. 细胞增殖分析

• 制备细胞悬液：细胞计数
• 接种到96孔板中：根据合适的铺板细胞数，每孔约100ul细胞悬液，同样的样本可做3个重复。
• 37℃培养箱中培养：细胞接种后贴壁大约需要培养2-4小时，如果不需要贴壁，这步可以省去。
• 加入10ul CCK8：由于每孔加入CCK8量比较少，有可能因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混匀。或者直接配置含10%CCK8的培养基，以换液的形式加入。
• 培养1-4小时:细胞种类不同，形成的Formazan的量也不一样。如果显色不够的话，可以继续培养，以确认最佳条件。特别是血液细胞形成的Formazan很少，需要较长的显色时间（5-6小时）。
• 测定450nm吸光度：建议采用双波长进行测定，检测波长450-490nm，参比波长600-650nm。

• 制备细胞悬液：细胞计数
• 接种到96孔板中：根据合适的铺板细胞数，每孔约100ul细胞悬液，同样的样本可做3个重复。
• 37℃培养箱中培养：细胞接种后贴壁大约需要培养2-4小时，如果不需要贴壁，这步可以省去。
• 加入不同浓度的毒性物质
• 37℃培养箱中培养：加入毒性物质的培养时间，要看毒性物质的性质和细胞的敏感性，一般要根据细胞周期来决定，起码要一代以上的时间。
• 加入10ul CCK8：由于每孔加入CCK8量比较少，有可能因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混匀。
• 培养1-4小时:细胞种类不同，形成的Formazan的量也不一样。如果显色不够的话，可以继续培养，以确认最佳条件。特别是血液细胞形成的Formazan很少，需要较长的显色时间（5-6小时）。
• 测定450nm吸光度：建议采用双波长进行测定，检测波长450-490nm，参比波长600-650nm。

三、服务说明及结果
1. 客户提供：药物。
2. 公司提供：基本实验步骤、CCK-8 检测结果。
3. 实验周期：10个工作日