文献支持LLC+GFP 小鼠肺癌细胞绿色荧光标记

注册证号 ：武汉赛奥斯生物科技有限公司

英文名 ：LLC-GFP,LLC/GFP

CAS号 ：见详情介绍

库存 ：999

供应商 ：武汉赛奥斯生物科技有限公司

肿瘤类型 ：见详情介绍

细胞类型 ：见详情介绍

ATCC Number ：见详情介绍

品系 ：见详情介绍

组织来源 ：见详情介绍

相关疾病 ：见详情介绍

物种来源 ：小鼠

免疫类型 ：见详情介绍

细胞形态 ：见详情介绍

是否是肿瘤细胞 ：见详情介绍

器官来源 ：见详情介绍

运输方式 ：常温/干冰

年限 ：见详情介绍

生长状态 ：见详情介绍

规格 ：1×10⁶cells

LLC+GFP小鼠肺癌细胞绿色荧光标记

产品编号：CL-671h

细胞介绍

Lewis肺癌是一种从C57BL小鼠的肺中建立的细胞系，该细胞带有原发性Lewis肺癌的植入所致的肿瘤，被广泛用作转移的模型，可用于研究癌症化学治疗剂的机制。该细胞通过慢病毒转染的方式携带GFP基因。

细胞特性

来源：小鼠肺癌组织

形态：半贴壁生长，混合形态，有上皮细胞样，松散贴壁或悬浮有梭形、圆形等细胞形态

含量：>1x10⁶cells

规格：T25x1瓶（常温运输）/ 2mL冻存管x2支（干冰运输）

用途：仅供科研使用

细胞筛选

该细胞为已经构建好的稳定转染GFP的细胞，随细胞传代次数的增加，其GFP荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度，可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。建议收到细胞后至少传3代，冻存留种后再进行筛选。

初次进行细胞筛选时，建议加入终浓度为1ug/mL嘌呤霉素的完全培养基维持培养，若无细胞漂浮或者漂浮较少，即可更换为含2ug/mL嘌呤霉素的完全培养基继续筛选，以此类推，至最高药物浓度为5ug/mL。若筛选过程中，漂浮细胞大于60%，则停止筛选，换成正常培养基培养，至细胞密度约80%，可继续加入同浓度嘌呤霉素进行筛选。当加入5ug/mL嘌呤霉素时细胞正常增殖，可停止筛选，用不含药完全培养基正常培养。

培养基及培养冻存条件准备

完全培养基	DMEM-H培养基，89% 优质胎牛血清，10% 双抗，1%
培养条件	气相：95%空气，5%二氧化碳；温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
冻存液	90%血清 + 10%DMSO，现用现配

细胞接收注意事项

收货当天发现异常，请在24小时内及时联系客服，逾期视为收货良好!

冻存管形式：收货后及时置于-80℃冰箱保存，若长时间不使用，应过夜转移至液氮。复苏时每管一次用完不得留存；

T25形式：①收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37℃培养箱放置2-4h（视细胞密度而定）稳定细胞状态，镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100x，200x各一张，观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况），以此做为收货依据；②有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中），加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。③运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。

 

细胞复苏、传代、冻存操作

（一）冻存细胞的复苏

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8mL完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

（二）细胞传代

待细胞密度达到80%~90%时，即可进行传代培养：

①　弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次；

②　加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4mL含10%FBS的培养基来终止消化；

③　轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8mL按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

（三）细胞冻存

收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例：

①　细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×10^7个活细胞/mL；

②　1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1mL冻存液含1×10^6~1×10^7个活细胞/mL分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息；

③　将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

注意事项：

①　所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

②　建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。