该产品被引用文献
原属于BD生命科学部Discovery Labware，2012年被Corning/康宁收购。BioCoat品牌专业提供各种细胞外基质蛋白、粘附分子、细胞因子和血清添加剂，为细胞培养耗材预包被不同成分的细胞外基质和粘附分子，为细胞提供更接近体内的生长环境。主要产品有Matrigel基质胶，collagen I, collagen II, collagen III, collagen IV, collagen V, collagen VI, collagen I, Fibronectin, Laminin,，PDL，粘连蛋白等。同时还提供肿瘤侵袭系统，血管生成系统，内皮细胞侵袭迁移系统，Caco-2检测系统等。
商品说明
康宁Matrigel基质是分离自Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) 小鼠肉瘤的可溶性基底膜提取物，该肿瘤富含细胞外基质蛋白，包括层粘连蛋白 (主要成分)、IV型胶原、硫酸乙酰肝素蛋白聚糖、巢蛋白和多种生长因子。研究人员能够利用康宁细胞外基质 (ECM) 模拟2D和3D细胞培养应用所需的体内环境。
康宁基底膜基质适合所有的培养基。
储存:
储存在-20°C 时是稳定的。应该通过分装并使用一次性分装物来最小化产品的冻融。在-20°C 冰箱中储存分装物直到准备使用。请不要储存在无霜冰箱中。请保持产品的冻结。
有效日期:
康宁基底膜基质的有效日期是批次特异的,您可以在产品的分析证明书中找到。
警告:
因为康宁基底膜基质在 10°C 以上会开始凝胶化,所以极其重要的是康宁基底膜基质和所有的进入与康宁基底膜基质接触的培养皿或培养基都应该预冷/冰冻。在实验的全部过程中请保持康宁基底膜基质处于冰上。
重构和使用:
在康宁基底膜基质小瓶冻融的过程中可能会发生颜色的变化,由于二氧化碳和碳酸氢盐缓冲液以及酚红的作用,颜色会从淡黄色变化到深红色。颜色的变化是正常的,不会影响产品的功效,颜色将会在 5%CO2平衡下消失。
请将小瓶淹没在冰中并放置在 4°C 冰箱里过夜解冻 Corning®Matrigel®基底膜基质。
一旦康宁基底膜基质被解冻,请涡旋小瓶以确保材料的均匀分散。请将康宁基底膜基质全程保持在冰上。
请使用无菌技术处理。请将解冻的康宁基底膜基质放置在无菌的区域,在小瓶的顶部喷洒 70%的乙醇并风干。
使用预冷的移液管轻柔的吸取康宁基底膜基质以确保其均匀性。分装康宁基底膜基质到离心管中,每当康宁基底膜基质堵塞吸头和/或移液管测量不时请更换吸头。如果将材料放置在 4°C 的冰上 24-48 个小时,凝胶化的康宁基底膜基质可能会被重新水化。
康宁基底膜基质可以被用来作薄层凝胶(0.5 mm),细胞可以接种在其顶部。当作为 1 mm 凝胶层使用时,细胞也可以在康宁基底膜基质的内部培养。
大量的稀释将会导致一个薄的、非凝胶化的蛋白层。这对于细胞附着是有用的,但是在分化研究中可能不起作用。
包被涂层方法:康宁基底膜基质可以以几种方式使用。薄层凝胶法适用于在凝胶顶部接种细胞,厚层凝胶法允许您在三维基质内培养细胞,薄层包被法(不凝胶化)给您提供了复杂的蛋白质层,您可以在其上培养细胞。您的选择基于您想要实现的最终结果,无论是细胞生长、附着还是分化。
注意:
在康宁支持网页上发布了具体的应用程序*。康宁基底膜基质产品的蛋白质浓度是批次特异的并提供在分析证明书上。通过计算需要的特定蛋白浓度(mg/mL)获得了稀释康宁基底膜基质产品的一致结果。为了维持凝胶化的一致性,我们推荐不要将康宁基底膜基质稀释到少于 3 mg/mL。请使用冰冷的无血清培养基来稀释康宁基底膜基质。通过在冰上移液管上下吸液或涡旋小瓶来混合。
薄层凝胶法：
1.依照推荐的方法解冻康宁基底膜基质。使用预冷的移液管,将康宁基底膜基质混合至均匀。
2.将培养板放置在冰上,以 50 μl/cm2向生长表面加入康宁基底膜基质。
3.将培养板放置在 37°C,30 分钟。
4.如果有必要的话,请在使用无血清培养基轻柔漂洗前吸出未结合的材料。请确保移液器的吸头不要刮擦包被的表面。培养板现在可以使用了。
厚层凝胶法：
1.依照推荐的方法解冻康宁基底膜基质。使用预冷的移液管,将康宁基底膜基质混合至均匀。
2.将培养板放置在冰上。向康宁基底膜基质中加入细胞并使用预冷的移液管悬浮。以
150-200 μl/cm2向生长表面加入康宁基底膜基质。
3.将培养板放置在 37°C,30 分钟。现在可以添加培养基了。细胞也可以培养在这一凝胶的顶部。
薄层包被法：
1.依照推荐的方法解冻康宁基底膜基质。使用预冷的移液管,将康宁基底膜基质混合至均匀。
2.使用无血清培养基将 Corning® Matrigel®基底膜基质稀释到需要的浓度。对于您的应用程序,您应该完成以经验为主的研究来确定您的最适包被浓度。
3.向被包被的容器中加入稀释的康宁基底膜基质。加入的量应该足以容易地覆盖整个生长表面。在室温下培养 1 个小时。
4.吸出未结合的材料并使用无血清培养基轻柔地漂洗。培养板现在可以使用了。
细胞复苏:
康宁中性蛋白酶(货号 354235),康宁细胞复苏溶液(货号 354253)。使用康宁细胞复苏溶液在冰上7小时内解聚康宁基底膜基质能够实现将生长在康宁基底膜基质上的细胞 效地复苏,或者与中性蛋白酶一起使用,中性蛋白酶作为一种金属酶可以分散连续培养的细胞。
