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文献和实验
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库存 ：大量
英文名 ：Plant Fructose-1,6-Diphosphate (FBP) Enzyme Kit
CAS号 ：WS5060W
保质期 ：3个月
供应商 ：上海瓦兰生物
保存条件 ：4℃
规格 ：96T
本试剂盒仅供科研使用
植物果糖-1,6-二磷酸（酯）酶(Fructose 1,6-bisphosphatase，FBP)
试剂盒说明书
（货号：WS5060W 微板法 96 样）
一、产品简介：
果糖-1,6 二磷酸酶又称果糖 1,6 二磷酸酯酶（FBP，EC 3.1.3.11），有两种 FBPase 存在于
光合细胞中。胞质型 FBP 主要存在于细胞质，参与蔗糖合成和糖异生途径；叶绿体型 FBP
存在于叶绿体中，它在二氧化碳同化途径中发挥调节作用。
FBP 催化 1,6 二磷酸果糖和水生成 6 磷酸果糖和无机磷，接着与酶促复合物相互作用，
伴随着 NADPH 的生成，通过检测 NADPH 在 340nm 处的增加速率，进而计算出 FBP 酶活
性大小。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液一
液体 100mL×1 瓶
4℃保存
提取液二
液体 100mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉剂 mg×1 支
4℃保存
用前甩几下或离心使试剂落入底
部，再加 1.1mL 蒸馏水溶解备用。
试剂二
粉剂 mg×1 支
-20℃保存
用前甩几下或离心使试剂落入底
部，再加 1.1mL 蒸馏水溶解备用。
试剂三
液体 20mL×1 瓶
4℃保存
试剂四
粉剂 mg×1 支
4℃保存
用前甩几下或离心使试剂落入底
部，再加 2.1mL 蒸馏水溶解备用。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、研钵和蒸馏水。
四、果糖-1,6-二磷酸（酯）酶(FBP)活性检测：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实
验样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 总FBP酶提取：建议称取约0.1g样本，加入1mL提取液二进行冰浴匀浆，于4℃，13000rpm
离心5min，取上清液测定。
② 胞浆和叶绿体 FBP 酶的分离：
称取约0.2g样本，加入1mL提取液一，快速冰浴匀浆后于4℃，1600rpm离心5min，弃
沉淀，取上清再4℃，5000rpm离心15min，取上清用于测定胞浆FBP酶活性，取沉淀加1mL
提取液二，强力涡旋震荡15s，置于冰上(或冰箱)孵育15min，在4℃，13000rpm离心5min，
取上清测定叶绿体中FBP酶活性。提示：整个叶绿体的提取过程须保持4℃低温环境。
建议测定总 FBP 酶活性，按照步骤①提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中的
FBP，则按照步骤②提取粗酶液。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，设置温度 25℃。
② 试剂解冻至室温（25℃）。
③ 在 96 孔板中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管本试剂盒仅供科研使用
2
样本
10
试剂一
10
试剂二
10
试剂三
150
轻轻混匀，室温（25℃）孵育 5min
试剂四
20
混匀，于 340nm 处测定，10s 时读取 A1，10min
后读取 A2，ΔA=A2-A1。
【注】若ΔA 在零附近徘徊，可以延长至 20min 后重新读取 A2，或则增加样本量 V1（如增
至 20μL，则试剂三相应减少），则改变后的反应时间 T 或样本量 V1 需重新代入计
算公司计算。
五、结果计算：
1、按样本蛋白蛋白浓度计算：
酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活性单位。
FBP(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(V1×Cpr)÷T
=643.1×ΔA÷Cpr
2、按照样本鲜重计算：
酶活定义：每克组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
FBP(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109] ÷(W×V1÷V)÷T
=643.1×ΔA÷W
V---加入提取液体积，1 mL；
V1---加入样本体积，0.01mL；
V2---反应体系总体积，2×10-4 L；
d---96 孔板光径，0.5cm；
ε---NADPH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；
W---样本质量，g；
T---反应时间，10min；
Cpr---蛋白浓度（mg/mL），建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒。
上海瓦兰生物科技有限公司
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金牌会员
入驻年限：11年
