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库存 ：大量
英文名 ：α- Mannosidase（ α- Mannosidase, α- Man) Activity detection kit
CAS号 ：WS0270W
保质期 ：3个月
供应商 ：上海瓦兰生物
保存条件 ：4℃
规格 ：48T
本试剂盒仅供科研使用
α-甘露糖苷酶（α-Mannosidase,α-Man）活性测定试剂盒说明书
（货号：WS0270W 微板法 48 样）
一、产品简介 ：
α-甘露糖苷酶（EC 3.2.1.24,α-Man）是参与植物体内 N-聚糖加工的关键酶之一。是植
物细胞壁糖蛋白代谢过程中的关键性糖苷酶，在分生组织的生长、果实的成熟软化、种子
的萌发等生理进程中起重要作用。
α-甘露糖苷酶（
α-Man）催化对硝基*酚-α-D-吡喃甘露糖苷产生对硝基*酚（PNP），
该产物在 405nm 处有特征吸收峰，通过测定 405nm 光吸收增加速率，即可计算α-甘露糖
苷酶活性。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉剂 mg×1 支
4℃保存
用前甩几下使试剂落入底部，再
加 1.1mL 蒸馏水超声溶解备用。
试剂二
液体 10mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
液体 10mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉剂×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、可调式移液器、低温离心机、天平、研钵、冰和蒸馏水。
四、α-甘露糖苷酶（
α-Man）活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本的制备：
① 组织样本：取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.5g），加入 1mL 提取液，进行冰
浴匀浆。12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为 1：5~10 比例提取。
② 细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细
胞，加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声
3s，间隔 10s，重复 30 次）；12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】若增加样本量，可按照细菌或细胞数量(104个)：提取液体积(mL)为 500~1000：1 的比例提取。
③ 液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min，调节波长至 405nm。
② 所有试剂解冻至室温（
25℃）在 EP 管中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
对照管
样本
10
10
试剂一
20
试剂二
70
90
迅速混匀，37℃保温 30min
试剂三
100
100
混匀，5min 后立即于 405nm 下读取吸光值 A，
ΔA=A本试剂盒仅供科研使用
2
测定-A 对照（每个测定管需设一个对照管）。
【注】：1. 若ΔA 在零附近，可增加样本加样体积 V1（即加样量增加至 40μL，则试剂二相应减
少），或延长保温时间 T（如：由 30min 延长至 60min 或更长），重新调整的 V1 和 T
需代入计算公式重新计算。
2. 若 A 测定值大于 1.5，可对样本上清液用蒸馏水稀释，则稀释倍数 D 代入公式计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y = 0.0425x + 0.0039；x 为标准品摩尔质量（nmol），y 为ΔA。
2、按蛋白浓度计算：
酶活定义：每毫克蛋白每分钟催化产生 1 nmol 对硝基*酚(PNP)为一个酶活单位。
α-甘露糖苷酶活性(nmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0039) ÷0.0425÷(V1×Cpr)÷T×D
=78.43×(ΔA-0.0039)÷ Cpr×D
3、按样本质量计算：
酶活定义：每克组织每分钟催化产生 1 nmol 对硝基*酚(PNP)为一个酶活单位。
α-甘露糖苷酶活性(nmol/min/g 鲜重)=(ΔA-0.0039) ÷0.0425÷(V1÷V×W)÷T×D
=78.43×(ΔA-0.0039)÷W×D
4、按细胞数量计算：
酶活定义：每 104个细胞每分钟催化产生 1 nmol 对硝基*酚(PNP)为一酶活单位。
α-甘露糖苷酶活性(nmol/min/104cell)=(ΔA-0.0039) ÷0.0425÷(V1÷V×细胞数量)÷T×D
=78.43×(ΔA-0.0039)÷细胞数量×D
5、按液体体积计算：
酶活定义：每毫升液体每分钟催化产生 1 nmol 对硝基*酚(PNP)为一个酶活单位。
α-甘露糖苷酶活性(nmol/min/mL)= (ΔA-0.0039) ÷0.0425÷V1÷T×D
=78.43×(ΔA-0.0039)×D
V---加入提取液体积，1mL；
V1---加入反应体系中样本体积，10μL=0.01mL；
W---样本质量，g；
500---细胞或细菌总数，500 万；
T---反应时间，30min；
D---稀释倍数，未稀释即为 1；
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒；
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（10μmol/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1mL 蒸馏水。
2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6, 2μmol/mL。也可根据实际
样本来调整标准品浓度。
3 在 96 孔板中依次加入：10μL 标准品+90μL 试剂二+100μL 试剂三，混匀于 405nm 下
读取吸光值，根据结果制作标准曲线。
上海瓦兰生物科技有限公司
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