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文献和实验
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库存 ：大量
英文名 ：Pectin Lyase (PL) Kit
CAS号 ：WS2070W
保质期 ：3个月
供应商 ：上海瓦兰生物
保存条件 ：4℃
规格 ：96T
本试剂盒仅供科研使用
果胶裂解酶（pectinate lyases，PL）试剂盒说明书
（货号：WS2070W 微板法 96 样）
一、产品简介：
果胶裂解酶(反式消去酶，EC 4.2.2.10)是通过反式消去作用裂解果胶聚合体的一种果
胶酶，主要来源于微生物，可提高水果出汁率，并在减少环境污染等方面具有潜在的应
用价值。
果胶裂解酶（PL）作用于果胶中的α-1,4 糖苷键，生成在还原端 C4 和 C5 之间位置具
有不饱和键的不饱和寡聚半乳糖醛酸，在 235nm 处有特征吸收峰。
二、试剂盒组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
提取液
液体 120mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 12mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
液体 12mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
液体 12mL×1 瓶
4℃保存
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板（UV 板）、天平、低温离心机、恒温水浴锅、研钵。
四、果胶裂解酶的测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实
验样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.2g），加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。
12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
② 细菌/培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细
胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间
隔 10s，重复 30 次）；12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：直接测定。若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min，调节波长至 235nm。
② 试剂一和试剂二预先在 50℃水浴 5min。
③ 在 EP 管中按照下表依次加入试剂：
试剂名称（
μL） 测定管
对照管
试剂一
120
试剂二
120
上清液
20
20
混匀，50℃反应 30min
试剂三
60
60
混匀，取 150μL 于 96 孔板（UV 板）测
定 235nm 处吸光值 A，△A=A 测定管-A本试剂盒仅供科研使用
2
对照管（每个样本做一个自身对照）。
【注】1. 若 A 测定管大于 2，可减少上清液取样量 V1（如减至 10μL 则用 10μL 的蒸馏水补齐），
则改变后的 V1 需代入公式重新计算。
2. 若△A 在零附近徘徊，可适当增加上清液取样量 V1（如增至 40μL 则试剂三相应减少），
或延长反应时间 T（如由 30min 延长至 60min），则改变后的 V1 和 T 需代入公式重新计算。
五、结果计算：
1、按照蛋白浓度计算：
酶活性定义：在 50℃，每毫克蛋白每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的
酶量为一个酶活力单位。
果胶裂解酶（PL）活性(nmol/min/mg prot)=△A÷(ε×d)×109×V2÷(V1×Cpr)÷T
=193.2×△A÷Cpr
2、按照样本质量计算：
酶活性定义：在 50℃，每克组织每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶
量为一个酶活力单位。
果胶裂解酶（PL）活性(nmol/min/g 鲜重)=△A÷(ε×d)×109×V2÷(V1÷V×W)÷T
=193.2×△A÷W
3、按细菌/细胞密度计算：
单位定义：在 50℃，每 1 万个细菌或细胞每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸
所需的酶量为一个酶活力单位。
果胶裂解酶（PL）活性(nmol/min/104 cell)=△A÷(ε×d)×109×V2÷(V1÷V×500)÷T
=0.39×△A
4、按液体体积计算：
酶活性定义：在 50℃，每毫升液体每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的
酶量为一个酶活力单位。
果胶裂解酶（PL）活性(nmol/min/mL)=△A÷(ε×d)×109×V2÷V1÷T=193.2×△A
ε---不饱和半乳糖醛酸摩尔消光系数：4600L/mol/cm；
d---比色皿光径，0.375cm；
V2---反应总体积，2×10-4L；
V1---反应体系中上清液体积，0.02mL；
V---加入提取液体积，1mL；
W---样本质量，g；
T---反应时间，30min；
500---细菌或细胞总数，500 万；
Cpr----样本蛋白浓度，mg/mL，建议使用本公式的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
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