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文献和实验
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库存 ：大量
英文名 ：Pyruvate phosphate double kinase (PPDK) activity assay kit
CAS号 ：WS1160W
保质期 ：3个月
供应商 ：上海瓦兰生物
保存条件 ：4℃
规格 ：96T
本试剂盒仅供科研使用
*酮酸磷酸双激酶( PPDK)活性测定试剂盒说明书
（货号：WS1160W 微板法 96 样）
一、产品简介：
*酮酸磷酸双激酶(pyruvate orthophosphate dikinase，PPDK，EC 2.7.9.1)是C 4途径和景
天科植物的一个重要限速酶，催化CO 2的原初受体磷酸烯醇式丙*酸(PEP)的形成，对植
物光合作用具有重要调节作用。
丙*酸磷酸双激酶(PPDK)逆向催化磷酸烯醇式*酮酸、AMP和 Ppi生成*酮酸、ATP
和Pi。偶联乳酸脱氢酶进一步催化丙*酸和NADH生成乳酸和NAD+。因此通过检测340nm
处NADH的下降速率，即可得出PPDK的酶活性大小。
二、测试盒组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 100mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉剂 mg×1 支
-20℃保存
用前甩几下或离心使粉剂落入底部，
再分别加 1.1mL 蒸馏水溶解备用。
试剂二
粉剂 mg×1 支
-20℃保存
试剂三
粉剂 mg×3 支
-20℃保存
用前甩几下或离心使粉剂落入底部，
每支分别加 0.44mL 蒸馏水溶解备用。
用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止
反复冻融，三天内用完。
试剂四
粉剂 mg×1 支
4℃保存
用前甩几下或离心使粉剂落入底部，
再加 2.2mL 蒸馏水溶解（可超声加速
溶解），备用。
试剂五
液体 15mL×1 瓶
4℃保存
试剂六
粉剂 mg×1 支
4℃保存
用前甩几下或离心使粉剂落入底部，
再分别加 1.1mL 蒸馏水溶解备用。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰。
四、丙*酸磷酸双激酶（PPDK）活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
称取约 0.1g 组织样本，加入 1mL 提取液，冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心 10min，
取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm。
② 所有试剂解冻至室温（25℃）。
③ 在 96 孔板中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
样本
10
试剂一
10
试剂二
10
试剂三
10本试剂盒仅供科研使用
2
试剂四
20
试剂五
130
试剂六
10
混匀，室温（25℃）条件下，立即于 340nm
处读取 A1，5min 后读取 A2。△A=A1-A2。
【注】 1.若△A 在零附近，可适当延长反应时间 T（如增至 10min 或更长读取 A2）。或适当加大样
本量 V1（如增至 20μL，则试剂五相应减少），则改变后的 T 或 V1 需代入公式重新计算。
2. 若起始值 A1 太大如超过 2（如颜色较深的植物叶片，一般色素较高），可减少样本加样
量 V1（如减至 5μL，则试剂五相应增加），则改变后的 V1 需代入计算公式重新计算。
或向待测样本中加少许活性炭混匀静置 5min 后 12000rpm, 4℃离心 10min，上清液用于检测；
3. 若ΔA 的值大于 0.5，则需减少反应时间 T（如减少至 1min），则改变后的反应时间 T 需代
入计算公式重新计算。
4. 若下降趋势不稳定，可以每隔 20S 读取一次吸光值，选取一段线性下降的时间段来参与
计算，相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每毫克组织蛋白在每分钟内氧化 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
PPDK 活性(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(V1×Cpr) ÷T
=1286.2×ΔA÷Cpr
2、按样本鲜重计算：
单位定义：每克组织在每分钟内氧化 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
PPDK 活性(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(W×V1÷V)÷T
=1286.2×ΔA÷W
V---加入提取液体积，1 mL；
V1---加入样本体积，0.01mL；
V2---反应体系总体积，2×10-4 L；
d---96 孔板光径，0.5cm；
ε---NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；
W---样本质量，g；
T---反应时间，5min；
Cpr---蛋白浓度（mg/mL），建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒。
上海瓦兰生物科技有限公司
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金牌会员
入驻年限：11年
