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文献和实验
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库存 ：大量
英文名 ：Neutral Invertase (NI)/Cytoplasmic Invertase Kit
CAS号 ：WS6150W
保质期 ：3个月
供应商 ：上海瓦兰生物
保存条件 ：4℃
规格 ：48T
本试剂盒仅供科研使用
中性/碱性转化酶（Neutral invertase, NI）试剂盒说明书
（货号：WS6150W 微板法 48 样）
一、产品简介：
蔗糖酶即蔗糖转化酶（Invertase，E.C.3.2.1.26）在蔗糖代谢中催化蔗糖分解为果糖和葡萄糖，是高等
植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 PH 值，蔗糖转化酶分为酸性转化酶（AI）和中性转化酶（NI）两
种类型，许多报道均将中性转化酶同碱性转化酶看作一种转化酶。NI 的最适 PH 值在 7.0 左右，主要存
在于细胞质中，负责分解细胞质中蔗糖为果糖和葡萄糖。
NI 催化蔗糖分解产生还原糖，进一步与 3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，经光谱扫
描在 540nm 有特征光吸收，在一定范围内 540nm 光吸收值与还原糖生成量成正比。通过光吸收增加速
率来计算 NI 活性
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉剂×1 瓶
4℃保存
用前加入 7.5mL 试剂一充分溶
解备用；用不完的试剂 4℃保存;
试剂三
液体 10mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
四、中性/碱性转化酶（NI）活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
称样本 0.1g（水分充足的样本可取 0.5g）于研钵中，加入 1mL 提取液，冰浴匀浆后
转入离心管中。12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注意】 若样本含糖量高，可引起 A 对照值较大如超过 1.6，即检测背景值过高会影响检测，可在样本
制备过程中增加除糖步骤：取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.5g），加入 1mL 经预冷的 95%乙醇
冰浴匀浆，4℃放置 10min；12000rpm，4℃离心 5min；弃上清，留沉淀，向沉淀中加入经预冷的 80%
乙醇混匀，4℃放置 5min；12000rpm，4℃离心 5min；弃上清，留沉淀。再向沉淀中加入 1mL 经预冷
提取液涡旋混匀，4℃放置 10min；12000rpm，4℃离心 10min；留上清，弃沉淀。上清液置冰上待测。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm。
② 在 EP 管中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
对照管
样本
40
40
试剂一
100
200
试剂二
100
混匀，37℃准确水浴 20min 后，95℃水浴 10min（用封口
膜缠紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀（以保
证浓度不变）。
试剂三
100
100
混匀，95℃水浴 10min（用封口膜缠紧，以防止水分散失），
流水冷却后充分混匀，吸取 200μL 转移至 96 孔板中，本试剂盒仅供科研使用
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540nm 处读取吸光值 A，ΔA=A 测定-A 对照（每个测定
管需设一个对照管）。
【注】：1.若吸光值大于 1.5，可以用蒸馏水稀释样本后测定，计算公式中乘以相应稀释倍数 D。
2.若ΔA 值在零附近徘徊，可增加样本加样体积 V1（如增至 80μL，则试剂一相应减少），
或延长 37℃水浴时间（如增至 40min 或更长），则相应的 V1 和 T 需代入公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程为 y = 0.0056x - 0.0153；x 为标准品质量（
μg），y 为ΔA。
2、按蛋白浓度计算：
单位定义：37℃每毫克蛋白每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
NI 活性(μg/min/mg prot)=[(ΔA +0.0153)÷0.0056]÷(V1×Cpr)÷T
=223.2×(ΔA +0.0153 )÷Cpr
3、按鲜重计算：
单位定义：37℃每克组织每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
NI 活性(μg/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0153)÷0.0056]÷(W×V1÷V2)÷T
=223.2×(ΔA +0.0153 )÷W
V---加入提取液体积，1mL；
V1---加入反应体系中样本体积，0.04mL；
T---反应时间，20min；
W---样本鲜重，g；
Cp---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒；
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（
5mg/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1mL 蒸馏水（母液需在两天
内用且-20℃保存）。
2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 1, 2, 3, 4, 5. mg/mL。也可根据实际样本来
调整标准品浓度。
3 按照：40μL 标准品+200μL 试剂一+100μL 试剂三，依次加样操作，95℃水浴 10min，
冷却后，取 200μL 至 96 孔板中，540nm 下测定，根据结果即可制作标准曲线。
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