产品详情
文献和实验
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库存 ：大量
英文名 ：Polysaccharide Content Determination Kit
CAS号 ：WS3950F
保质期 ：3个月
供应商 ：上海瓦兰生物
保存条件 ：4℃
规格 ：48T
本试剂盒仅供科研使用
多糖含量试剂盒说明书
(货号：WS3950F 分光法 48 样）
一、产品简介：
糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙
黄色化合物，且颜色稳定，在波长 488 nm 处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量
呈线性关系正比，从而可以利用分光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的
多糖含量，本方法可用于多糖含量的测定
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
粉剂×3 支
4℃保存
临用前甩几下使试剂落入底部，
每支分别加 1.9mL 水溶解备用。
标准品
粉剂×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、水浴锅/金属浴、可调式移液器、乙
醇、浓硫酸（不允许快递）、研钵。
四、多糖含量的测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1 多糖待检液制备：
a.组织样本：
① 样本烘干研磨过 40 目筛，称取 3mg 过筛后细末至 2mLEP 管中，加入 2mL 蒸馏水，
于沸水浴（95-100℃）加热 2 小时（若放在金属浴上面可用重物压盖防止 EP 管崩
开；间隔 20min 带防护手套轻轻晃动混匀几下），加热结束后取出放置至室温，
8000rpm 离心 5min，
② 取 0.2mL 上步离心后的上清液至新 EP 管中，再加入 1mL 乙醇混匀，于 4℃放置 1
小时，取出后 8000rpm 离心 5min 后弃上清，留沉淀；
③ 上步所得沉淀中再加入 1mL80%乙醇混匀几下（自备：取 80mL 乙醇溶于 20mL 蒸
馏水中），8000rpm 离心 5min 后弃上清，留沉淀（可采用使 EP 管轻轻倒置于吸
水纸上约 5min 吸干剩余上清液，尽量避免沉淀损失）；
④ 向上步所得沉淀中加入 2mL 蒸馏水，于沸水浴（95-100℃）加热直到沉淀全部溶
解（约 5min）即多糖待检液。
b.液体样本：
① 取 0.2mL 液体(可先做两个样本预测定，确定适合本批液体样本取样量 V2)，至新
EP 管中，再加入 1mL 乙醇混匀（使乙醇在整个液体中占比至少 80%），于 4℃放
置 1 小时，取出后 8000rpm 离心 5min 后弃上清，留沉淀；
②上步所得沉淀中再加入 1mL80%乙醇混匀几下（自备：取 80mL 乙醇溶于 20mL 蒸
馏水中），8000rpm 离心 5min 后弃上清，留沉淀（可采用使 EP 管轻轻倒置于吸
水纸上约 5min 吸干剩余上清液，尽量避免沉淀损失）；
③ 向上步所得沉淀中加入 2mL 蒸馏水，于沸水浴（95-100℃）加热直到沉淀全部溶
解（约 5min）即多糖待检液。
2、上机检测：本试剂盒仅供科研使用
2
① 可见分光光度计预热 30min，调节波长至 488nm，调节水浴锅或金属浴至 95-100℃。
② 向标准品中加入 1mL 蒸馏水即 1mg/mL 葡萄糖母液，用蒸馏水稀释 20 倍（1 份母液:19
份水）成 0.05mg/mL 葡萄糖，用于测定。在 EP 管中依次加入：
试剂（
μL）
测定管
空白管（仅做一次）
多糖待检液
200
标准品
蒸馏水
200
试剂一
100
100
浓硫酸(务必缓慢加入)
500
500
混匀放入 95℃水浴 20min（封口膜缠紧，防止水分散失），冷
却至室温后，取全部澄清液体转移至 1mL 玻璃比色皿（光径
1cm）中，于 488nm 读取吸光值 A，ΔA=A 测定管-A 空白管。
【注】:1. 如果ΔA 大于 1.5，需要将样本用蒸馏水稀释，计算公式中乘以相应稀释倍数 D。
2. 若ΔA 值在零附近即低于 0.005，则可增加样本取样质量 W，则改变后的 W 需代
入公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准方程为 y = 56.157x - 0.0036；x 为标准品质量（mg），y 为吸光值ΔA。
2、按样本重量计算：
多糖(mg /g 重量)=[(ΔA+0.0036)÷56.157]÷(W×V1÷V)×10×D
=1.781×(ΔA+0.0036)÷W×D
3、按质量分数（%）计算：
多糖(%重量)=[(ΔA+0.0036)÷56.157]÷(W×V1÷V)×10×D×10-3×100%
=[0.1781×(ΔA+0.0036)÷W×D]%
4、按液体体积计算：
多糖(mg /mL 液体)=[(ΔA-0.0065)÷86.454]÷(V2×V1÷V)×10×D
=2.313×(ΔA-0.0065)÷V2×D
V---样品提取液总体积，2mL；
V1---测定时待检液体积，0.2mL；
V2---液体取样体积，mL；
10---②歩中取 0.2mL 处理后变成 2mL 体积；
W---样本质量，g；
D---自行稀释倍数，未稀释即为 1W---样本质量，g；
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（1mg/mL）：从标准品管中称量取出 2mg 至一新 EP 管中，再加
2mL 蒸馏水混匀溶解即 1mg/mL 的葡萄糖（母液需在两天内用且-20℃保存）。
2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05.
mg/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。
3 依据测定管的加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。
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