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文献和实验
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库存 ：大量
英文名 ：Nitrite content in food kit
CAS号 ：WS1340W
保质期 ：3个月
供应商 ：上海瓦兰生物
保存条件 ：4℃
规格 ：96T
本试剂盒仅供科研使用
食品中亚硝酸盐含量测定试剂盒说明书
（货号：WS1340W 微板法 96 样）
一、产品简介：
在食品中，亚硝酸盐是肉制品及其他食品加工过程中常用的一种食品添加剂，但是人
体长期摄入亚硝酸盐过量的食品，产生直接毒害和慢性毒害，因此硝酸盐的检测具有特
别重要的意义。
待检样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下，亚硝酸盐与对氨基*磺酸重氮
化后，再与盐酸萘乙*胺偶合形成紫红色染料，在 540nm 处有特征吸收峰。进而计算得
出亚硝酸盐含量。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液A1 液体 13 mL×1 瓶
4℃保存
提取液A2
粉体 mg×1 瓶
4℃保存
临用甩几下使粉剂落入底部，再
加 6mL 的蒸馏水充分溶解备用。
提取液A3
粉体 mg×1 瓶
4℃保存
临用甩几下使粉剂落入底部，先
加 0.18mL 的乙酸，再加 5.82mL
的蒸馏水，溶解备用。
试剂一
粉体 mg×1 瓶
4℃避光保存
临用甩几下使粉剂落入底部，再
加 5m
L 的 20%
盐酸水溶液
（1m
L
盐酸缓慢加入
4mL
蒸馏水中
），
充分溶解备用。
试剂二
粉体 mg×1 瓶
4℃避光保存 临用甩几下使粉剂落入底部
，再
加
3mL 蒸馏水溶解备用。
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、蒸馏水、天平、常温离心机、乙酸、盐酸。
四、食品中亚硝酸盐含量测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！
1、样本处理
① 干酪奶酪样本：称取约 0.3g 样本于研钵中，加 1mL 蒸馏水研磨成匀浆后全部转移
至 2mLEP 管中，再加入 0.04mL 的 3%乙酸溶液（0.3mL 冰乙酸缓慢加入 9.7mL 水
中），最后用蒸馏水定容到 2mL。4℃静置 20min 后，除去上层脂肪，12000rpm 室
温离心 10min，取上清液检测。
② 液体奶制品：0.5mL 样本，加入 0.125mL 提取液 A1，混匀后加入 0.6mL 蒸馏水，
沸水浴 15min，冷却至室温，加入 0.05mL 提取液 A2，混匀后加入 0.05mL 提取液
A3，混匀，用蒸馏水定容到 2mL，室温静置 30min，除去上层脂肪，12000rpm 离心
取上清液检测。
③ 其他样本：称取约 0.1g 样本（含水量高可取 0.5）于 2mLEP 管中，加入 0.125mL 提
取液 A1，混匀后加入 1.5mL 蒸馏水，组织研磨机破碎或者用研钵磨碎后再全部转
移至 2mLEP 管中；沸水浴 15min，冷却至室温，加入 0.05mL 提取液 A2，混匀后
加入 0.05mL 提取液 A3，混匀，用蒸馏水定容到 2mL，室温静置 30min，除去上层
脂肪，12000rpm 室温离心 10min，取上清液检测。
【注】：若高蛋白样本，提取后上清液依然浑浊，可以减少样本取样量 W，或在提取过程中将提取本试剂盒仅供科研使用
2
液 A2 和 A3 分别增加到 0.1mL（不能超过 0.1mL），蒸馏水相应减少。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm。
② 标准品使用液配制：称取 2mg 标准品至一新 EP 管中，再加 2mL 蒸馏水溶解标准
品即 1mg/mL 的亚硝酸*标准品溶液，再用蒸馏水稀释 500 倍（1 份母液+499 份蒸
馏水）即 2μg/mL 的亚硝酸*标准品使用液。
③ 在 96 孔板中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
空白管
（仅做一次）
标准管
（仅做一次）
样本
190
蒸馏水
190
标品使用液
190
试剂一
40
40
40
混匀，室温（25℃）准确反应 5min
试剂二
20
20
20
混匀，室温（25℃）准确反应 15min，立即于 540nm 读取吸光
值 A，△A=A 测定-A 空白。
【注】：最低检出限：液体乳是 0.06mg/kg；干酪及其他样本是 1mg/kg。
五、结果计算：
1、液体样本计算公式：
食品中亚硝酸盐含量(以亚硝酸*计)（mg/L）=△A÷(A 标准-A 空白)×C 标×V÷V 样×D
=8×△A÷(A 标准-A 空白)×D
2、固体样本计算公式：
食品中亚硝酸盐含量(以亚硝*钠计)（mg/kg）=△A÷(A 标准-A 空白)×C 标×V÷W×D
=4×△A÷(A 标准-A 空白)÷W×D
V---提取液总体积，2mL；
C 标---标准品浓度，2μg/mL 亚硝酸*；
V 样---液体样本取样检测体积，0.5mL；
D---稀释倍数，未稀释即为 1；
W---实际取样质量，g。
上海瓦兰生物科技有限公司
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