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库存 ：大量
英文名 ：Soil Phosphodiesterase (S-PDE) Kit
CAS号 ：WS0430W
保质期 ：3个月
供应商 ：上海瓦兰生物
保存条件 ：4℃
规格 ：48T/96T
本试剂盒仅供科研使用
土壤磷酸二酯酶（S-PDE）活性测定试剂盒说明书
(货号:WS0430W 微板法 96 样)
一、产品简介：
土壤磷酸二酯酶（S-PDE，EC 3.1.4.1）是在土壤磷酸单酯酶之后的的第二大磷酸酶。
其在土壤有机磷的循环代谢中起到重要作用。
本试剂盒提供一种简单、灵敏、快速的的检测方法。土壤磷酸二酯酶（S-PDE）催化
双(4-硝基*)磷酸酯 （BNP P）生成黄色的产物 PNP，该产物在 405nm 处有最大吸收峰。
通过检测 PNP 在 405nm 下的增加速率，即可得到 S-PDE 酶活性大小。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
液体 120mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉剂 mg×6 支
4℃保存
临用前每支甩几下或离心使粉剂落入
底部，每支再加 4mL 蒸馏水充分溶解，
现配先用，两天内用完。
试剂三
液体 80mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉剂 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、台式离心机、水浴锅或恒温培养箱、天平、可调式移液器。
四、土壤磷酸二酯酶（S-PDE）活性测定：
1、样本制备：
取新鲜土样或干土（风干或者 37 度烘箱风干），先粗研磨，过 40 目筛网备用。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30 min，调节波长到 405 nm。
② 在离心管中依次加入下列试剂：
试剂名称（
μL）
测定管
对照管
土样
0.1g 鲜土或 0.05g 干土
0.1g 鲜土或 0.05g 干土
试剂一
500
500
试剂二
100
37℃（水浴锅或恒温培养箱）振荡反应 1 h
试剂三
400
400
试剂二
100
混匀，12000rpm 室温离心 5min，立即取上清液 200μL 于 96 孔板中，立
即于 405nm 下读取吸光值 A，△A= A 测定- A 对照（参考注意事项）。
【注】：1.若 A 测定超过 1.5，可对最后一步的待检测上清液(测定管和对照管)同时进行稀释（用水稀释即
可），稀释倍数 D 代入计算公式；
2.若ΔA 在零附近徘徊，可延长 37℃的孵育时间 T（如增至 4 小时或更长），或增加土样质量 W（如
增至 0.2g）。则改变后的 T 和 W 需代入计算公式重新计算。
3.若同时检测同一背景下的土壤样本，此批土壤样本可做做三次样本自身对照管（取平均值作为
这批土壤样本的对照管），节省时间；若是不同背景下的土壤样本（如黑土，红土，黄土等），
则每个样本需做一个自身对照，即按照说明书加样表操作即可，本试剂盒仅供科研使用
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五、结果计算：
1、标准曲线：y = 0.0127x - 0.01；x 是 PNP 摩尔质量（nmol）， y 是△A。
2、活性定义：在 37℃，每克土壤每小时水解 BNP P 产生 1nmol PNP 定义为 1 个酶活单位。
S-PDE(nmol/h/g 土样)=[(△A+0.01)÷0.0127]÷W÷T×D=78.74×(△A+0.01)÷W×D
W---土壤样品质量，g；
D---稀释倍数，未稀释即为 1；
T---催化反应时间，1 h；
PNP 相对分子质量---139.11。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（10μmol/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1.4mL 蒸馏水超声溶解，
若有结晶析出，需 37℃水浴至完全溶解。
2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 2, 4, 6, 8, 10 μmol/mL。也可根据实际样本
来调整标准品浓度。
3 在 EP 管中直接加入：10μL 标准品+590μL 试剂一+400μL 试剂三，混匀，立即取上
清液 200μL 于 96 孔板中，立即于 405nm 下读取吸光值 A。
4 根据结果制作标准曲线。
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