NADP苹果酸酶（NADPME）生化检测试剂盒

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英文名 ：详见说明书

保质期 ： 6个月

供应商 ：帛科

保存条件 ： 2-8℃冷藏

规格 ：100管/96样/50管/48样

公司产品仅供科研实验，不得用于临床诊断！
产品名称：NADP苹果酸酶（NADPME）生化检测试剂盒
规格：100管/96样、50管/48样
产品分类：辅酶Ⅱ系列
实验类型：微量法、紫外分光光度法
商品详情：
NADP苹果酸酶（NADPME）生化检测试剂盒测定意义：
ME广泛存在于微生物、培养细胞、动物和植物胞浆中，尤其在植物组织中活性较高。ME催化苹果酸氧化脱羧的可逆反应，产生酸和CO2，以及伴随NAD(P)+的还原反应，是苹果酸代谢的关键酶。ME活性与生物合成和抗氧化密切相关。近年来植物ME活性测定较多，已经成为抗氧化研究的热点。根据辅酶专一性和对底物特异性的不同，可将ME分为NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。
测定原理：
NADP-ME催化NADP+还原成NADPH，在340nm下测定NADPH增加速率。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液一：液体100mL×1瓶，4℃保存。
提取液二：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1瓶，-20℃保存；
试剂二：液体20mL×1瓶，4℃保存；
试剂三：液体14uL×1支，4℃保存；
 



 
组织样本的前处理：
①总GAPDH酶提取：建议称取约0.1g样本，加入1mL提取液一，冰浴匀浆后超声破碎（冰浴，200W，破碎3s，间歇7s，总时间1min），然后4℃，8000g离心10min，取上清测定。
②胞浆和叶绿体GAPDH酶的分离：按照植物组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5～10的比例（建议称取约0.1g样本，加入1mL提取液一），冰浴匀浆后于4℃，200g离心5min，弃沉淀，取上清在4℃，8000g离心10min，取上清用于测定胞浆GAPDH酶活性，取沉淀加1mL提取液二，震荡溶解后超声破碎（冰浴，200W，破碎3s，间歇7s，总时间1min），然后4℃，8000g离心10min，取上清测定叶绿体中GAPDH酶活性。
建议测定总GAPDH酶活性，按照步骤①提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中的GAPDH，则按照步骤②提取粗酶液。
细菌或培养细胞的前处理
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
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