ATP柠檬酸裂解酶（ACL）生化检测试剂盒

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英文名 ：详见说明书

保质期 ： 6个月

供应商 ：帛科

保存条件 ： 2-8℃冷藏

规格 ：100管/96样/50管/48样

商品属性：

产品名称	规格	实验类型	货号
ATP柠檬酸裂解酶（ACL）生化检测试剂盒	100管/96样、50管/48样	微量法、紫外分光光度法	BKS2009

商品详情：

ATP柠檬酸裂解酶（ACL）生化检测试剂盒测定意义 高密度脂蛋白为血清蛋白之一，主要由肝脏合成，运载周围组织中的胆固醇，再转化为胆汁酸或直接通过胆汁从肠道排出，是一种抗动脉粥样硬化的血浆脂蛋白，是冠心病的保护因子，俗称“血管清道夫”，对冠心病的临床诊断是一个重要的参考指标。 测定原理 用沉淀剂分离血清中的高密度脂蛋白胆固醇，利用酯酶催化胆固醇酯水解生成游离胆固醇和游离脂肪酸，从而把胆固醇酯转化为FC；进一步利用胆固醇氧化酶催化FC氧化，生成△4-胆甾烯酮和H2O2；再利用过氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林和酚，生成红色醌类化合物；在500nm有特征吸收峰。 需自备的仪器和用品 离心机，恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。

试剂组成和配制 ：
提取液：液体100mL×2瓶，4℃保存。  
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前加2mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1支，-20℃避光保存。临用前加1mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：粉剂×1支，-20℃避光保存。临用前加1 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂五：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前加4 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
 



 
酶液提取：
①总PGK酶提取：建议称取约0.1g样本，加入1mL提取液，冰浴匀浆后超声破碎（冰浴，200W，破碎3s，间歇7s，总时间1min），然后4℃，500g离心5min，取上清测定。
②胞浆和叶绿体PGK酶的分离：按照植物组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5～10的比例（建议称取约0.1g样本，加入1mL提取液），冰浴匀浆后于4℃，500g离心5min，弃沉淀，取上清在4℃，8000g离心10min，取上清用于测定胞浆PGK酶活性，取沉淀加1mL提取液，震荡溶解后超声破碎（冰浴，200W，破碎3s，间歇7s，总时间1min），然后4℃，500g离心5min，取上清测定叶绿体中PGK酶活性。
建议测定总PGK酶活性，按照步骤①提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中的PGK，则按照步骤②提取粗酶液。
测定操作
分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
取微量石英比色皿/96孔板，依次加入100μL试剂一，20μL试剂二，10μL试剂三，10μL试剂四，40μL试剂五，20μL粗酶液，充分混匀，记录340nm处10s的吸光值A1和310s的吸光值A2，△A=A1-A2
计算公式
ATP柠檬酸裂解酶（ACL）生化检测试剂盒用微量石英比色皿测定的计算公式如下
（1）按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PGK（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V反总÷(V样×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr
（2）按照样本质量计算
酶活单位定义：每克组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PGK（nmol/min /g 鲜重）＝ΔA÷（ε×d）×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T=321.54×ΔA÷W
V反总：反应体系总体积，0.2mL；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g
用96孔板测定的计算公式如下
（1）按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PGK（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V反总÷(V样×Cpr) ÷T=643.08×ΔA÷Cpr
（2）按照样本质量计算
酶活单位定义：每克组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PGK（nmol/min /g 鲜重）＝ΔA÷（ε×d）×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T=643.08×ΔA÷W
V反总：反应体系总体积，0.2mL；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g
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